| 저자(한글) |
QIN, Yu-hong,LIU, Kun-mei,LIAO, Guo-ling,YANG, Hua,XU, Guang-xian,LI, Xiu-ping,GUO, Le |
| 초록 |
목적: 헬리코박터 파일로리(Helicobacter pylori, Hp) 우레아제(Urease) Hp는 중요한 맞춤형 인자이자 병원성 인자이다. Hp 우레아제의 활성 위치는 Hp 우레아제 B 서브유닛(urease B subunit, UreB)에 있다. 그러므로 UreB 기반의 Hp 백신을 연구 개발하는 것은 Hp 감염에 대한 예방 치료에서 전망적인 방법이다. 방법: 본 논문은 주로 유전자 클로닝 기술을 이용하여 헬리코박터 파일로리의 표준 균주 SS1(Hp SS1)에서 Hp 우레아제 B의 서브유닛 유전자를 얻고, 재조합 Hp 우레아제 B 서브유닛(rUreB) 유전자를 함유한 재조합 발현 벡터 pET-rUreB 및 해당 재조합 균주를 구축하였다; 재조합 균주에 대한 단백질 발현과 최적화 처리 후, Ni-NTP 니켈 이온의 친화성크로마토그래피와 DEAE Sepharose FF 음이온 교환크로마토그래피를 통하여 재조합 우레아제 B 서브유닛(rUreB)을 정제하였다. 그리고 복강 내 주사법을 통하여 BALB/c 생쥐를 면역시키고 rUreB의 면역학 성질을 연구하였다. 결과: 유전자 클로닝 기술을 통하여 Hp 우레아제 B 서브유닛 유전자를 획득하는데 성공했으며, 재조합 발현 벡터 pET-rUreB 및 해당 재조합 균주 BL21(DE3)/pET-rUreB를 구축하는데 성공했다. 단백질 발현의 최적화와 정제를 통하여 고순도(96.5%)의 재조합 단백질 rUreB을 얻을 수 있다. 재조합 단백질 rUreB과 프로인트항원보강제(Freund's adjuvant)를 이용한 복강 주사법을 통하여 BALB/c 생쥐를 면역시켰다. 간접적인 ELISA 감정 결과, 생쥐는 천연적인 Hp 우레아제와 UreB에 대하여 적정 농도(Titer)가 높은 특이성 항체를 생성할 수 있으며 Hp 우레아제의 활성을 뚜렷하게 억제할 수 있다. 결론: 재조합 Hp 우레아제 B 서브유닛은 대장간균 시스템에서 고수준으로 발현될 수 있으며, 면역학 특이성을 갖고 있다. 그의 항체는 Hp 우레아제의 활성을 효과적으로 억제할 수 있다. 연구 결과는 Hp 감염을 예방 치료할 수 있는 우레아제 기반의 Hp 백신을 연구하는데 일정한 실험 기초를 마련하였다. |
