| 저자(한글) |
WANG, Bei,LI, Gui-huan,WANG, Pei,TANG, Ju-fen,LU, Yi-shan,WU, Zao-he,JIAN, Ji-chang |
| 초록 |
역돔(Oreochromis niloticus) 유래 B군연쇄상구균(Streptococcus agalactiae)의 용혈소(Hemolysin, Hly)에 의한 어체의 면역보호 작용을 연구하고자, 이미 획득한 B군연쇄상구균 ZQ0910 전 유전체 서열의 프라이머를 설계하고 hly 유전자를 증폭시킨 후, 원핵 발현 벡터 pET-28a 내에서 지향성 클로닝을 진행하였다. 또한 원핵 재조합 플라스미드 pET-28a-hly를 구축하여 IPTG로 발현을 유도한 후, 서브유닛 백신을 제조하여 유전적 개량을 거친 역돔을 면역시켰으며, 백신의 면역 보호력을 분석하였다. 연구 결과, hly 유전자 산물의 크기는1,335 bp, 44개 아미노산을 코딩할 수 있었으며, 시퀀싱을 통하여 GenBank에 보고된 연쇄상구균(Streptococcus)의 Hly 아미노산 서열과의 상동성이 99%에 달한다는 것을 알 수 있었다. IPTG로 발현을 유도한 후, SDS-PAGE 분석을 통하여 1개의 51.7 kD인 특이 밴드를 발견하였다. Western blotting 분석 결과, 발현된 Hly 단백질은 His-Tag 단일클론 항체와 특이적으로 결합될 수 있었다. 제조된 서브유닛 백신으로 어체를 면역시킨 후, 14일에 항체가 생성되고 28일에 피크에 달하는 것을 검출할 수 있었다. 항체 역가는 1?4,096, 면역 보호율은 70%였다. 그러므로 해당 서브유닛 백신이 B군연쇄상구균에 의해 유발된 역돔 연쇄상구균증(streptococcicosis)의 예방을 위한 유전공학적 백신으로 이용될 것으로 전망된다. |
