| 저자(한글) |
LI, Jun-ming,LIN, Heng,GE, Gao-shun,ZHANG, Li-chao,YU, Fang,HU, Xue-jun |
| 초록 |
목적 : 본 논문은 구성적 발현을 하는 재조합 인간 C-반응 단백질(Recombinant human C-reactive protein, rhCRP)인 피치아 효모(Pichia pastoris) 공정균(engineer strains)을 구축하고, rhCRP를 발현, 정제하였으며 또한 그 면역 반응성(immunity reactivity)을 감정하였다. 방법 : 설계하여 합성한 rhCRP 유전자를 발현벡터 pGAPZ alpha;A에 클론한 후 피치아 효모 X-33에 형질 주입(transformed into)시켜 구성적 분비 발현을 진행하고, rhCRPHis를 친화성 크로마토그래피(Histamine affinity chromatography) 로 정제하였다. 그리고 SDS-PAGE, Western blot과 간접효소 면역측정법(indirect ELISA)을 이용아혀 표적 단백질을 검사하고 또한 그 면역 반응성(immunity reactivity)을 감정하였다. 결과 : 재조합 발현 벡터(expression vector) pGAPZ alpha;A/rhCRP를 제한효소절단(restricting enzyme digestions) 및 DNA 서열분석(DNA sequencing)으로 감정한 결과 성공적으로 구축되었다는 것을 입증하였다. 재조합 피치아 효모 공정균은 성공적으로 분자량이 23kDa인 rhCRP를 구성적 발현시키고, 27시간 후 최대 발현 수준에 도달하였으며, 발현량이 약 3mg/L인 것으로 나타났다. 더 한층 분리 및 정제를 통하여 순도가 96.58%인 rhCRP를 얻고, 간접효소 면역측정법으로 검사한 결과 rhCRP는 면역 반응성이 있었다. 결론 : 성공적으로 구성적 분비 발현을 하는 rhCRP 피치아 효모 균주를 구축하였는데 이는 인간 CRP 검사 시약을 자주적으로 연구개발하는데 기초를 마련하였다. |
