| 저자(한글) |
CHEN, Gui-hua,SHU, Chang-long,LI, Ying,SONG, Fu-ping,GUO, Yuan-yuan,LI, Guo-xun,ZHANG, Jie |
| 초록 |
cry2 유전자는 여러 가지 인시목(Lepidoptera) 해충에 대해 높은 독성을 갖고 있으며, cry1A 유전자와 상호 저항성이 없고, 중요한 응용적 가치를 갖고 있다. 본 논문에서는 바실러스 튜링겐시스(Bacillus thuringiensis, Bt) cry2 살충 유전자 자원의 선별과 감정 효율을 향상하고자, 이미 보고한 모든 cry2A 유전자의 보존영역을 분석하였으며, 4쌍의 일반 프라이머를 설계하였다. 2,000주의 Bt 균주 유전체 DNA 혼합 샘플에 대해 PCR 증폭을 진행하였으며, 454 고처리 서열분석기로 이러한 혼합 증폭 산물에 대해 시퀀싱하였다. 시퀀스 총량에 280,704개 Reads가 있으며 서열 분석 결과, 이러한 Bt 균주 중에 이미 알려진 9개 유형의 cry2 유전자가 포함되었으며, 그중 cry2Ae와 cry2Ai 이 2개 유형은 중국 내 Bt 균주에서 보고되지 않은 유전자이다. 동시에 또 새로운 cry2류 유전자의 조각을 발견하였다. 잇따라 특이성 프라이머를 설계하였으며, 절반 길이 유전자 조각 cry2-1과 cry2-2를 증폭하여 얻었고, 중첩 PCR법을 심도있게 활용하여 전체 길이 새로운 유전자 cry2X를 얻었는데 해당 유전자의 코딩영역은 1,902 bp이며 633개 아미노산을 코딩한다. 그 아미노산 서열은 Cry2Ab13 단백질과의 유사성이 가장 높았으며 93%에 달하였고 제3등급의 패턴 유전자에 속하였다. 중합효소 연쇄 반응-고처리 시퀀싱(polymerase chain reaction-high throughput sequencing, PCR-HTS)을 연합한 유전자 감정 방법을 구축하였는데 이는 빠르고 영민하고 정확하며 고처리 및 피복 범위가 넓은 등 장점을 갖고 있다. 또한 Bt 균주 중 이미 알려진 살충 유전자에 대해 감정할 수 있을 뿐만 아니라 새로운 유전자도 발견할 수 있으며 Bt 유전자 감정, 발굴에서 중요한 역할을 할 것이다. |
