| 초록 |
DNA 재조합, 원핵발현, Chitin-Beads 칼럼과 HPLC 정제, 질량분석 감정 등 기술을 이용하여 새로운 2형 당뇨병의 저항성이 있는 VPAC2 수용체 자극제(VPAC2-specific agonist) RD를 제조하고, Ⅱ형 당뇨병 치료에서의 인슐린 신호 전달에 대한 효과적인 촉진 기능이 나타내는 분자 메커니즘을 초보적으로 연구하였다. 실험 결과: 유전자 재조합 기술을 이용하여 제조한 VPAC2 수용체 자극제 RD의 분자량이 3,785.0 Da, 순도가 96%이었다; 재조합 펩티드를 정상 지방세포 혹은 인슐린 저항성의 3T3-L1 지방세포(IR 모델 세포)에 작용하였다. 그 결과 1 μmol/L와 5 μmol/L의 재조합 펩티드 RD는 정상적인 3T3-L1 지방세포 IRS-1 단백질의 발현(각각 36%와 42% 증가)을 촉진하였지만, IR 모델 세포 IRS-1 단백질이 나타내는 발현 증가에 대한 촉진 작용보다 뚜렷하지 못했다(각각 55%와 63% 증가). IR 모델 세포를 1, 5와 10 μmol/L 재조합 펩티드 RD로 처리한 후, pIRS1(ser307)의 발현 수준이 각각 5.9%, 10.7%와 32.7% 감소하였다. IR 모델 세포 가운데서, 5와 10 μmol/LRD로 처리한 그룹의 IRS-2 단백질 발현 수준이 각각 12.8%와 40.6% 감소하였다; 그러나 1, 5와 10 μmol/LRD로 각각 처리한 그룹의 pIRS2 단백질 발현 수준은 각각 35.1%, 40.8%와 48.5% 감소하였다. 5와 10 μmol/L RD로 처리한 그룹의 IR 모델 세포 가운데서, Akt 단백질의 발현이 뚜렷하게 강화하였고 발현량이 각각 74%와 77% 증가하였다. 1, 5와 10 μmol/L의 재조합 펩티드 RD로 처리한 IR 모델 세포 가운데서, Akt Ser473의 인산화 수준이 각각 33.9%, 64.0%와 71.1% 감소하였다; AktThr308의 인산화 수준은 각각 13.5%, 78.6%와 83.3% 향상하였다. 본 논문은 재조합 VPAC2 수용체의 자극제 RD의 제조 기술을 구축하고, 체외 세포 수준에서 해당 효과[정상 3T3-L1 지방세포 및 IR 모델 세포 IRS-1 단백질의 발현에 대한 선명한 촉진 작용; IR 모델 세포 pIRS1(ser307), IRS-2, pIRS2 단백질의 발현에 대한 감소 작용; IR 모델 세포 Akt 단백질의 발현 및 Akt Thr308 인산화 수준에 대한 촉진 작용 등]를 검측함으로써, 그가 2형 당뇨병 치료 중에서의 분자 작용 메커니즘과 약용 연구 개발에 실험적 기초를 제공하였다. |
