| 저자(한글) |
ZHANG, Huan,GUO, Qian,HU, Yu-qian,CAO, Lei,GAI, Ke-ke,QIANG, Zhao-yan |
| 초록 |
목적: 렌티바이러스로 유도된 성장 분화 인자 15 유전자의 저 발현이 신경교종 U373 세포의 화학 약제인 테니포시드(teniposide, VM-26)와 시스플라틴(cisplatin, DDP)에 대한 내성에 미치는 영향 및 그 가능한 메커니즘을 연구 논의하였다. 방법: GDF15를 표적으로 하는 GDF15-RNAi를 렌티바이러스 벡터 GV248에 클로닝하여 shRNA 렌티바이러스 LV-GDF15-RNAi를 구축한 다음, 관련 없는 서열을 이용하여 음성 대조군 렌티바이러스 LV-RNAi를 구축하였으며, 또한 각각 U373 세포에 감염시킨 후 Western blotting을 통하여 형질감염이 세포 내 GDF15의 발현에 미치는 영향을 검사하였다. VM-26(0.1, 0.5, 2.5 및 12.5μg/ml) 및 DDP(0.08, 0.4, 2 및 10μg/ml)의 질량농도 구배를 통하여 LV-GDF15-RNAi 그룹과 LV-RNAi 그룹의 세포를 48h 처리한 다음, MTT법 및 Hoechst/PI 이중 염색법을 통하여 LV-GDF15-RNAi 형질감염이 U373 세포의 VM-26 및 DDP에 대한 내성에 미치는 영향을 검사하였으며, 또한 Western blotting법으로 LV-GDF15-RNAi 형질감염이 U373 세포 사멸과 관련된 단백질 Bcl-2, Bcl-xL, P53 및 Caspase-3의 발현에 미치는 영향을 검사하였다. 결과: GDF15를 안정적으로 저 발현시킨 U373 세포계를 성공적으로 구축하였으며 LV-GDF15-RNAi 그룹의 세포 내 GDF15의 발현은 LV-RNAi 그룹 및 야생형 U373 세포 내에서보다 뚜렷하게 감소하였다(0.013±0.001 vs 0.622±0.068, 0.601±0.004, 모두 P VM-26 및 DDP의 농도가 가장 낮을 경우, LV-GDF15-RNAi 그룹의 세포 생존율은 LV-RNAi 그룹[VM-26 0.1μg/ml : (91.84±264)% vs (80.71±2.66)%, P 같은 농도의 VM-26 및 DDP로 처리한 조건에서, LV-GDF15-RNAi 그룹의 세포 사멸수는 LV-RNAi 그룹보다 적었다. 동시에, LV-GDF15-RNAi 그룹에서 Bcl-2 및 Bcl-xL의 발현량은 LV-RNAi 그룹에서보다 뚜렷하게 증가한 반면(P 결론: 신경교종 U373 세포 내 GDF15 수준의 하향 조절은 세포가 VM-26 및 DDP에 대한 내성을 증진시킬 수 있었으며 그 메커니즘은 GDF15에 의한 Bcl-2, Bcl-xL, P53 및 Caspase-3 발현의 조절과 상관성이 있는 것으로 보였다. |
