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논문 기본정보
Interference on the Proliferation and Apoptosis of Human Multiple Myeloma Cells in vitro
논문 개요
| 기관명 | NDSL |
|---|---|
| 저널명 | 中國生物工程雜誌 = Journal of Chinese biotechnology |
| ISSN | 1671-8135, |
| ISBN |
논문저자 및 소속기관 정보
| 저자(한글) | ZHANG, Hao-ran,ZENG, Zhi-yong,CHEN, Jun-min |
|---|---|
| 저자(영문) | |
| 소속기관 | |
| 소속기관(영문) | |
| 출판인 | |
| 간행물 번호 | |
| 발행연도 | 2013-01-01 |
| 초록 | 목적 : RNA 간섭기술을 이용하여 DEPTOR 유전자의 shRNA 렌티바이러스 벡터를 구축하는데에 관해 탐구, 다발성 골수종 RPMI-8226 세포의 침묵효과를 검증, 또한 DEPTOR가 다발성 골수종 세포 증폭과 자살기능에 미치는 영향을 평가한다. 기법 : 4개 DEPTOR siRNA 서열을 디자인하고 화학적합성후 어닐링(annealing) 하여 이중 가닥을 형성한다. 다음 다이제스트한 hU6-MCS-CMV-EGFP(GV115)-shRNA 렌티바이러스 벡터에 클로닝한다. 재조합 플라스미드는 PCR 분석검증후 리포솜을 매개로 하여 293T 세포를 형질주입한다. Western blot으로 DEPTOR의 발현을 검측하여 간섭효과가 가장 좋은 GV115-shRNA를 선별한다. 선별한 GV115-shRNA를 렌티바이러스 packaging 플라스미드와 293T 세포를 동시유입하여 바이러스를 생성한다. 바이러스 상청(upper)을 수집하고 농축한 후 농도를 측정한다. 비리온을 감염한 다발성 골수종 RPMI-8226 세포를 Real-time PCR 방법으로 mRNA 수준과 Western blot 방법을 이용하여 단백질 수준에서 DEPTOR의 침묵효과를 검측한다. MTT 법으로 골수종 세포 증폭기능의 변화를 검측, 유세포분석기로 세포자살을 검측, Western blot으로 cleaved caspase-3과 cleaved PARP의 변화를 분석한다. 결과 : 구축한 렌티바이러스 벡터 shRNA의 PCR검증과 분석은 모두 정확하고 DEPTOR 발현을 제어하는 shRNA2 서열을 성공적으로 선별하였다. Packaging 바이러스후 적정농도는 1×10 9 TU/ml에 이르렀다. 렌티바이러스 감염 RPMI-8226 세포후 EGFP를 발현할수 있다. Real-time PCR 와 Western blot으로 DEPTOR 발현을 검측하는 수준은 내려갔다. DEPTOR 유전자를 낮추면 골수종 세포의 생장속도를 뚜렷이 감소할수 있으며(P lt;0.05) 종양세포의 자살율은 올라간다(P lt;0.01). DEPTOR shRNA으로 cleaved caspase-3, cleaved PARP과 Bax 발현을 높이고 Bcl-2 및 PI3K/Akt 신호전달의 발현을 낮춘다(P lt;0.01). 결론: DEPTOR shRNA 재조합 렌티바이러스 벡터를 성공적으로 구축하였다. 다발성 골수종 RPMI-8226 세포를 형질주입후 DEPTOR의 발현을 제어하였다. DEPTOR shRNA는 골수종 세포의 자살을 효과적으로 유도할수 있을뿐만 아니라 종양세포의 증폭 또한 제어할 수 있다. PI3K/Akt 신호전달은 자살과정에 참가 했을 수 있다. |
| 원문URL | http://click.ndsl.kr/servlet/OpenAPIDetailView?keyValue=03553784&target=NART&cn=NART69976058 |
| 첨부파일 |
추가정보
| 과학기술표준분류 | |
|---|---|
| ICT 기술분류 | |
| DDC 분류 | |
| 주제어 (키워드) | DEPTOR,Multiple myeloma,RNA interference,Proliferation,Apoptosis,DEPTOR,다발성 골수종,RNA 간섭,증폭,자살 |