| 저자(한글) |
LI, Li-hua,QIU, Jian-jian,CAI, Yi-qin,YU, Peng,LIU, Jing-wen |
| 초록 |
에밀리아니아 헉슬레이 바이러스(Emiliania huxleyi virus, EhV)인 EhV99B1의 유전체에서 세린 프로테아제(serine protease, Sp) 유전자(GenBank 등록번호:KC161207)를 복제하고 해당 유전자의 개방형 해독틀(open reading frame, ORF)에 대해 계통적인 생물정보학적 분석을 진행하며, 아울러 해당 유전자의 대장균에서의 융합 발현을 실현하고 친화성 크로마토그래피(affinity chromatography)기법을 이용하여 정제된 재조합 Sp를 획득한다. 연구 결과: EhV99B1-Sp 유전자의 ORF는 1,110bp이었고 368개의 아미노산을 부호화하였으며 단백질의 상대적 분자량은 39.5kDa이었다; 해당 유전자 조각은 GenBank 홈페이지에 등록된 EhV86-Sp와 상동성이 매우 높았고 뉴클레오티드(nucleotide)의 서열 및 그에 대응하는 아미노산의 서열과의 상동성은 각각 95%, 97%인 반면에 기타 종의 Sp와 서열의 상동성은 28%~32%에 그쳤다. 이는 해당 유전자 조각이 세린 프로테아제 패밀리의 새로운 맴버일 가능성이 있다는 것을 설명한다; 2차구조적 특징의 예측에 따르면, EhV99B1-Sp의 단백질 도메인에는 LTAGHC(히스티딘의 활성 부위)와 AICNGDSGGPLF(세린의 활성 부위)라는 2개의 대표적인 세린 프로테아제 촉매 활성 부위의 아미노산 모티프가 있는데, 이것은 EhV99B1-Sp가 2개의 막관통 도메인(transmembrane domains)을 포함한 막관통 단백질이라는 것을 보여주었다; 해당 유전자를 대장균 내에서 저온 조건 아래 발현을 유도하면 분자량이 60kDa인 재조합 단백질을 얻게 되는데, 근원 섬유 결합형 세린 프로테이나아제(myofibril-bound serine proteinase, MBSP)에 의해 Sp인 것으로 확인되었고 아울러 재조합 단백질은 대장균 세포에서 분명한 생물학적 활성을 가지고 있었다. 본 연구결과는 EhV99B1-Sp가 바이러스와 숙주의 상호 작용 과정에서 담당하는 조절 역할 및 그 기능과 응용을 한층 더 탐구하는데 기반을 마련하였다. |
