| 초록 |
목적: 대장간균에서 단순포진바이러스 1형(Herpes Simplex Virus 1, HSV-1)의 낭막 당단백인 gD를 발현하고, 재조합 단백질을 정제하여 해당 면역 활성을 감정하는 것이다. 방법: HSV-1 gD 유전자를 원핵 발현 벡터 pET-28b에 복제하고, IPTG(Isopropyl-1-thio-β-D-galactopyranoside)를 이용하여 재조합 플라스미드로 형질전환한 대장간균을 유도하여 IPTG 농도, 유도 시간, 유도 온도가 재조합 단백질의 발현에 미치는 영향을 논의하였다; 구아니딘염산(guanidine hydrochloride) 분해를 통하여 봉입체를 성질을 변경시키고 니켈 친화성크로마토그래피법을 사용하여 gD 단백질을 정제한 후, 정제 후의 단백질을 투석하여 복원하였다; Western blot와 ELISA 법으로 gD 단백질의 면역 활성을 검측하였다. 결과: 효소 절단과 서열 측정 결과, gD 유전자를 pET-28b 벡터에 복제하는데 성공했다. 해당 재조합 플라스미드로 형질전환한 대장간균은 IPTG 유도 후, 주로 봉입체 형식으로 존재하였으며 크기가 약 40kDa이었다. gD 단백질로 유도 발현할 수 있는 최적의 조건은 0.5mmol/LIPTG를 37℃ 온도로 8시간 유도하는 것이다. 니켈 칼럼 친화성크로마토그래피법으로 정제하여 얻은 gD 단백질의 총량은 3.1mg/L, 투석과 복원 후에 얻은 gD 단백질의 총량은 1.3mg/L, 복원율이 41.37%이었다. Westernblot 및 ELISA 검측 결과, 발현한 gD 단백질은 면역 활성을 갖고 있었다. 결론: 대장간균에서 발현과 정제를 통하여 면역 활성을 가진 HSV-1 gD 단백질을 얻어, HSV-1 진단 시약과 예방 접종을 제조하는데 기반을 마련하였다. |
