| 저자(한글) |
YANG, Cui-cui,TONG, Hui-li,MA, Xing-hong,DU, Wei,LIU, Dan,YANG, Yu,YAN, Yun-qin |
| 초록 |
마이오스타틴(Myostatin, MSTN) 유전자는 골격근의 생장과 발육을 음성적 조절할 수 있고 소의 MSTN 유전자 돌연변이는 '이중-근육(double-musle)' 특징을 나타낼 수도 있다. 본 논문에서는 전사 활성자 유사 효과기 핵산분해효소(transcription activator-like effector nucleases, TALENs)를 이용하여 소 태아 섬유아 세포(fetal fibroblast)의 MSTN 유전자를 표적화(targeting) 녹아웃(knockout) 하여 MSTN 유전자 녹아웃 세포계(cell line)를 얻었고 MSTN 유전자 녹아웃 소를 제작하는데 재료를 마련하였다. 한 쌍의 MSTN 유전자 TALENs 진핵 세포 발현 벡터(eukaryotic expression vector)를 구축하고 각각 PEI 형질 감염 시약(transfection reagent)과 전기천공법(electroporation)을 이용하여 소 태아 섬유아 세포의 형질 감염을 진행하였다. 서열 측정 결과를 통하여 TALEN 기술이 소 MSTN 유전자의 녹아웃에 유용하다는 것을 알 수 있었다. 또한, T7 핵산 내부 가수분해효소1(T7 endonuclease 1, T7E1)을 이용하여 해당 돌연변이 효율을 검출하는 결과, 전기천공법의 녹아웃 효율은 20.4%였다. 한계희석법(limiting dilution method)을 통하여 10개의 MSTN 유전자 녹아웃의 세포 클론(MSTN +/- , MSTN -/- 포함)을 얻었으며 해당 표적 위치(target site)의 염기값(base number)은 1~20 사이이고 일부분에서 틀 이동 돌연변이(frame-shift mutation)가 나타났다. 틀 이동 돌연변이가 나타난 세포계는 MSTN 유전자 녹아웃의 유전자 변형 육용우(genetically modified beef cattle)를 제작하는데 사용될 수 있다. |
