| 저자(한글) |
FENG, Zheng-fu,WANG, Lin,LI, Wen-xia,BU, Fan,HU, Yan-jiang,ZHU, Wei |
| 초록 |
RNA 추출은 분자 생물학 연구 과정의 기초 실험이다. 그러나 해양 무척추동물(marine invertebrate)의 생체 조직(tissue) 구조 및 체성분의 특수성으로 인하여 현재 사용하는 RNA 추출 방법으로 해당 작업을 진행할 수 없다. 본 논문은 해삼(Apostichopus japonicus), 비단가리비(Chlamys farreri), 흰다리새우(Litopenaeus vannamei)를 연구 대상으로 하였으며, 구아니딘 티오시아네이트(guanidine thiocyanate) 시약으로 RNA를 추출하는 방법을 개선하였다. 비단가리비와 흰다리새우의 간췌장(hepatopancreas)에는 RNase가 대량으로 함유되었다. 그러나 해삼의 체벽(body wall) 구조는 치밀하였고, 콜라겐(collagen)이 대량으로 함유되었으며, 성숙기 고환(testis)에 다당류(polysaccharides)가 많이 함유되어 있었다. 그러므로 해당 동물의 생체 조직에서RNA를 추출할 때 기존의 방법을 개선하여 순식간에 추출액을 분산시킬 수 있는 물질을 증가하였고, 클로로포름(chloroform) 및 산성 페놀(phenol)로 추출하는 차수를 증가하거나 혹은 고농도 염화나트륨(NaCl) 용액을 첨가하는 방법을 사용하였다. 실험 결과, 개선한 방법으로 획득한 RNA는 완전한 28S, 18S와 5S rRNA밴드가 있었고, A 260nm /A 280nm 와 A 260nm /A 230nm 비율이 각각 1.89~2.0와 1.98~2.11이었으며, β-액틴(β-actin) 유전자 증폭 밴드가 뚜렷하였다. 이것은 획득한 생체 조직 RNA의 순도(purity)와 품질은 cDNA 합성 및 유전자 기능 연구 요구에 적합하다는 것을 설명한다. |
