| 초록 |
박테리아인공염색체 기술(bacterial artificial chromosome)을 이용하여 직렬연결의 HIV-1 gp160, gag와 protease 유전자 및 발현 소자를 1형 단순포진 바이러스(Herpessimplex virus type 1, HSV-1) 내부의 역방향 반복 서열에 삽입하여, HIV-1 항원을 함유한 단순포진 바이러스 벡터 백신(a viral vector vaccine)을 얻었다. 먼저 HIV-1 gp160(B형과 C형), gag와 protease 유전자 직렬연결을 pcDNA3에 클로닝하여 재조합 플라스미드 pcDNA/gBgp와 pcDNA/gCgp를 얻었다. 재조합 플라스미드로 293FT 세포를 형질전환하고 Western blotting 기법으로 HIV 항원 발현을 검출하였다. 그리고 pcDNA/gBgp와 pcDNA/gCgp 가운데서 HIV-1 항원 유전자와 발현 소자를 포함한 발현틀을 pKO5/BN에 클로닝하여 재조합 셔틀 플라스미드(Shuttle plasmid) pKO5/BN/gBgp와 pKO5/BN/gCgp를 얻었다. 전기충격 형질전환(electro transformation) 기법으로 셔틀 플라스미드를 BAC-HSV 함유의 대장간균에 형질전환하여 재조합 DNA를 얻고 Vero 세포를 형질전환시켰다. 바이러스 용균 반점(Viral plaque)을 선택하여 재조합 바이러스를 정제하였다. Southern blotting 기법으로 재조합 바이러스 DNA를 감정하고 Western blotting 기법으로 재조합 바이러스 감염 세포 중 HIV 항원의 발현을 검사하였다. 동시에 바이러스의 증식 특성을 분석하였다. Western blotting 기법으로 분석한 결과, pcDNA/gBgp와 pcDNA/gCgp로 형질전환한 293FT 세포에서 gp160과 gag 단백질 발현을 검출하였다. pKO5/BN/gBgp와 pKO5/BN/gCgp의 전기충격 형질전환을 통하여 재조합 균주를 얻고, 재조합 DNA로 형질전환한 Vero 세포로부터 재조합 HSV를 정제하여 얻었다. Southern blotting 기법으로 분석한 결과, 재조합 HSV 게놈이 특이성 재조합을 발생하였으며 재조합 바이러스 감염 세포 가운데서 gp120와 gp41을 검출할 수 있었다. 또한 재조합 HSV는 포유동물 세포의 클로닝 능력을 보유하고 있었다. 본 연구에서는 HIV-1 gp160, gag와 protease 유전자를 함유한 재조합 HSV를 얻었다. 또한 이 재조합 HSV는 포유동물 세포의 클로닝 능력을 보유하고 있었다. 그러므로 HIV-1 복제형 바이러스 벡터 백신으로 사용할 수 있다. |
