| 초록 |
에러 유발 PCR 기법(error-prone PCR)으로 쥐 페에서 길이가 다른 nGLP-1R(21번째 아미노산~145번째 아미노산)의 무작위적(randomly) 돌연변이 파지 디스플레이 펩타이드 라이브러리(phage display peptide library)를 구축하였다. 파지 디스플레이 기법으로 GLP1(glucogan-like peptide 1) 수용체 N 말단 조각(nGLP-1R)에서 한 두 조각의 유전자가 제거된 후 여전히 Exendin-4를 결합하는 활성을 지니고 있는지에 대해 측정하였다. ELISA 분석 결과, 결합 활성이 없는 돌연변이 균주를 발견 하였으며 EP16이라 명명하였다. 서열을 측정하고 비교해 본 결과, 발견 된 EP16은 앞쪽 20개, 뒤쪽 10개 아미노산이 제거되었으며 52번째 트립토판은 돌연변이 하여 아르기닌(arginine)으로 되였다. EP16과 Exendin-4가 결합 활성이 없는 원인을 알아보기 위해 앞 20개, 뒤 10개의 아미노산이 없는 야생형 EP16과 아르기닌으로 돌연변이 한 52번째 트립토판 nGLP-1R WS2R 를 재조합하여 EP16과 비교 분석하였다. 결과, EP16의 결합 감소는 보존된 52번째 트립토핀이 돌연변이 하여 아르기닌으로 되면서 유발된 것으며 제거된 앞쪽 20개와 뒤쪽 10개 아미노산은 그 생물학 활성에 영향을 주지 않았다. 따라서 키 시퀀스(key sequence)에 아미노산 잔기(amino acid residue)의 돌연변이는 nGLP-1R 단백질의 생물학 활성을 변화시킬 수 있다. |
