| 저자(한글) |
WANG, Xiang,ZHANG, Xiu-chun,YU, Nai-tong,ZHOU, Peng,LIANG, Jie,LIU, Zhi-xin |
| 초록 |
본 논문에서는 2쌍의 프라이머 PCR을 이용하여 각각 BBTV(Banana bunchy top virus) cp, BBTV mp 단편을 증폭한 다음, 각자의 PCR 산물을 혼합시켜 융해와 어닐링(annealing)을 진행하여 1/4 양 끝에서 EcoR I와 BamH I를 함유하는 PCR 산물을 얻었다. 또한, 그것을 효모 이중 교잡 시스템의 pGBKT7 미끼 벡터에 각각 클론하여 pGBKT7-cp와 pGBKT7-mp를 성공적으로 얻었다. 재조합 플라스미드를 효모 Y2H 균주 내로 도입하고 형질전환 시킨 후, 미끼 벡터의 자기 활성화 검증과 독성 검증을 진행하였다. 연구 결과, 정확한 BBTV-cp와 BBTV-mp 유전자 단편을 얻었으며 pGBKT7 미끼 벡터에 성공적으로 클론하였다. 동시에 SD/-Trp 영양 결함 평판에서 형질전환된 미끼 벡터 Y2H는 생장이 양호하였다. 이는 미끼 벡터의 발현 산물이 효모세포에 대해 독성이 없고 리포터유전자에 대해 자기 활성화 작용이 없는 것으로 나타났다. 마지막 자기 활성화 검증 결과를 통하여 pGBKT7-cp와 pGBKT7-mp가 해당 시스템의 상호작용 단백질 선별에 적용될 수 있는 것으로 확정하였다. 해당 결과는 효모 이중 교잡 시스템을 이용하여 CP, MP 단백질 상호작용의 숙주 단백질을 검출하는데 기초를 마련하였다. |
