| 초록 |
SBP(HBsAg binding protein)는 HBsAg를 탐침으로, 인간의 간 cDNA 퍼지 발현 라이브러리(expression library)를 통하여 선별한 인간 내원성 단백질이다. SBP는 HBsAg(Hepatitis Bvirus surface antigen)과 특이적으로 결합할 수 있으며 B형 간염 백신의 면역 효과를 강화할 수 있다. 그러므로 잠재적이고 신속하며, 고효율적인 면역 보조제이다. 본 논문은 분비형 고발현 SBP의 피치아 효모 공정균을 구축하는데 성공했다. 해당 균주의 발효 규모를 확대하여 발현시키고, 그에 대한 정제 공정을 연구하였다. 발효 과정에 대한 실시간 검측 과정에서 메탄올 유도제를 첨가해서부터, SBP 단백질의 분비 발현량은 시간이 흐름에 따라 점차 증가하였는데, 38시간 지났을 때 최적의 수준에 도달했으며 잡질이 섞인 단백질의 함량이 가장 적었다. 그러므로 이 시간은 균액을 수집하기 가장 적합한 시간이다. 저온에서 원심법을 이용하여 18 L 발효액의 균체와 침전물을 분리하고, 상층액을 15 L 수집하였다. 그리고 수분 보유력(Retention capacity)이 5 kDa의 한외여과막(ultrafiltration membrane)을 사용하여 상층액을 2 L로 농축시켰다. 그리고 S200 분자 선별 칼럼과 TDEAE 음이온 교환 칼럼을 차례 순서로 사용하여 농축 후의 상층액을 분리 정제하여, 농도가1.125 mg/ml이고 순도가 98%에 달하는 표적 단백질을 300 ml 얻었다. 발효액의 수율은 22.5 mg/L이었다; 마지막으로 단백액을 정량적으로 분해하여 각각 포장한 후 동결 건조법으로 저장하였다. 본 논문에서 얻은 규모를 확대한 SBP 발효의 유도 발현 조건과 SBP 단백질의 분리 정제 공정은 SBP 단백질의 대규모적인 생산에 튼튼한 기반을 마련하였다. |
