| 저자(한글) |
WANG, Jing-mei,WANG, Zhi-ping,YU, Jin-xin,LIU, Xin-ying,SHAO, Bin,LAN, Jin-jin,MA, Li-fang,CHEN, Zi-yuan |
| 초록 |
동결-융해를 이용한 세포벽 파괴(cell wall breaking by freeze-thaw)와 단계별 단백질 추출(proteins extracting step-by-step) 기술을 이용하여 Arthrospira platensis(미세조류) 2-DE 분석 단백질 제조방법을 개선하여, 나선형 키랄성(Helical chirality) 차등발현 유전자의 연구에 시험 사용하였다. 그 결과, (1) A. platensis 세포는 5차례의 반복적인 동결-융해 후 완전히 파괴되며, Tris-HCl 추출액으로 3차례 추출 후 87%에 가까운 수용성 단백질을 얻었으며, 다시 SOS(12 도데실황산나트륨, twelve sodium dodecyl sulfate) 추출액으로 침전물 중에서 불용성 단백질을 얻었다. (2) 상술한 수용성 단백질과 불용성 단백질을 각각 TCA/아세톤 방법으로 정화한 후 2차원 전기영동(2-DE) 분석을 진행한 결과, 식별 가능한 단백질 반점은 각각 500개와 760개 이상이며, 매칭율은 7%뿐이다. 이는 분리도와 질량이 양호하다는 것을 설명한다. (3) 상술한 방법을 이용하여 13개의 A. platensis의 나선형 키랄성과 관련된 후보 단백질을 획득하였다. 그 중, 5개는 최초로 발견되었으며, 후보 단백질의 기능은 광합성 작용, 에너지 대사, 물질 배출 및 환경 적응 등에 참여한다. (4) 본 연구에서 구축한 ldquo;동결-융해를 이용한 세포벽 파괴 및 단계별 추출법 rdquo;은 기존의 A. platensis 2-DE 단백질 제조방법보다 조작이 편리하고, 장비가 간단하며, 경제적이고, 정보량이 풍부한 장점이 있다. |
