| 저자(한글) |
YAN, Lei,LI, Jing,ZHAO, Ting-ting,WANG, Hui-juan,WANG, Lei,LAI, Guo-qi |
| 초록 |
목적: 쥐 CB1(rCB1) 유전자의 진핵 발현 벡터를 구축하고 세포에서 rCB1 유전자의 발현을 검사하며 인간 자궁경부암 CaSki 세포 사멸에 미치는 rCB1의 영향을 연구한다. 기법: 쥐 뇌조직에서 총 RNA를 추출한 다음 rCB1 유전자를 RT-PCR 증폭한다. 효소 절단, 정제, PCR 정제 생성물과 pCDNA3.1(+) 플라스미드의 연결을 통해 pcDNA3.1(+)-rCB1을 구축한다. 지질체(liposomes) 방법을 사용하여 pcDNA3.1(+)-rCB1을 HEK293 세포와 CaSki 세포에 형질주입한다. Western blot 및 세포 면역형광법을 공초점 레이저 주사 현미경과 결합하여 rCB1의 발현을 검사하고 위치를 확인한다. 유세포 분석기를 사용하여 세포 사멸률을 검사하고 Western blot과 실시간 형광 정량 PCR 방법을 사용하여 rCB1, Bcl-2, Bax, Bad의 발현을 검사한다. 결과: 재조합 플라스미드에 대한 효소 절단을 통해 5,300 bp의 벡터 단편과 1,500 bp의 목표 단편을 획득하였다. 서열 측정 결과는 rCB1 유전자 서열(NM_012784.4)과 일치하였다. HEK293 세포를 형질전환 후 rCB1은 HEK293의 세포막과 세포질에서 발현하였다. CaSki 세포를 형질전환 후 rCB1은 세포 사멸률을 증가시켰다(P 결론: pcDNA3.1(+)-rCB1 진핵 발현 벡터를 성공적으로 구축하였다. rCB1은 세포막과 세포질에서 발현하였고 자궁경부암 CaSki 세포의 사멸을 뚜렷하게 촉진하였다. 그 작용 메커니즘은 Bax, Bad의 발현을 상향 조절하고 Bcl-2의 발현을 억제하는 것이었다. |
