| 저자(한글) |
GAO, Dong-ni,JIN, Li-ying,GE, Jing-ping,WANG, Kun,AN, Qi,PING, Wen-xiang,LOU, Zhuang-wei |
| 초록 |
[목적] 포유동물 세포 특이성 프로모터-인간 신장인자1α 프로모터(Elonggation factor 1α promoter,EF1-α)를 선택하고, 바이러스 위형(pseudotype) 도구-절단 수포성 구내염 바이러스 G 단백질(Truncated Vessicular stomatitis virus protein G, VSV-GED)을 이용하여, 우드척 간염바이러스 전사후 조절요소(Woodchuck hepatitis virus post-transcriptional regulatory element, WPRE)와 아데노연관바이러스 말단 역반복 서열(Inverted terminal repeats, ITRs)을 첨가하여 바큐로바이러스(baculovirus)의 전달 효율과 외원성 유전자의 발현 수준을 높이고자 한다. [방법] pFB-VSV-GED-WPRE에 기반하여 EF1α 프로모터를 포함한 2개의 재조합 바큐로바이러스 전이 벡터 pWK와 pWK-ITR를 구축하였다. 강화한 녹색형광 단백질(Enhanced Green Fluorescent Protein, eGFP) 유전자를 리포터 유전자로 하여 EF1α 프로모터의 하류에 삽입하였다. 재조합 전이 벡터 pWK-eGFP와 pWK-ITR-eGFP 및 음성 대조 그룹 pWK(-)-eGFP를 구축하였다. 구축한 재조합 플라스미드를 Sf9 곤충 세포에 형질전환하여 재조합 바큐로바이러스를 획득하였다. 희소돌기신경교질세포((OL 세포)를 감염시킨 후, 역상형광현미경을 이용하여 녹색형공 단백질의 발현 상황을 관찰하였다. [결과] WPRE와 ITRs를 포함한 바이러스 BV-WK-eGFP, BV-WK-ITR-eGFP의 형광 발현율은 음성 대조 그룹보다 현저히 높았고, ITRs는 eGFP의 발현 시간을 효과적으로 연장시킬 수 있었는데, 대조 그룹 BV-WK(-)-eGFP보다 72시간 연장하였다. VSV-GED 위형 바큐로바이러스 BV-WK-eGFP, BV-WK-ITR-eGFP를 통하여 OL 세포를 전달하는 시간을 현저히 단축하였는데, 음성 대조 그룹 BV-WK(-)-eGFP보다 24시간 단축되었으며, 전달 효율은 각각 음성 대조 그룹보다 25.7%와 36.5% 높았다. [결론] 실험은 VSV-GED가 바큐로바이러스의 전달 효율을 효과적으로 높이고, WPRE가 외원성 유전자의 발현 효율을 현저히 증가시키며, ITRs가 외원성 유전자의 발현 시간을 연장할 수 있다는 것을 증명하였다. 개선형 재조합 바큐로바이러스가 척추동물 세포에서 외원성 유전자를 발현하는 것을 연구하고, 새로운 재조합 라이브 벡터 백신(live vector vaccine)을 연구하기 위한 이론적 기반을 마련하였다. |
