| 저자(한글) |
ZOU, Qin,YANG, Guang,LUO, Hong,GONG, Xiao-hong,SUN, Wen-ping |
| 초록 |
본 논문은 폐렴 연쇄상구균(Streptococcus pneumonia) (ATCC49619) 자기 분해제(autolysin) lytA의 전체 서열 유전자에 대한 복제와 발현을 통하여 일부 작은 단편 단백질을 얻었으며 초보적으로 해당 면역 활성을 연구하였다. GenBank중의 폐렴 연쇄상구균 M66 균주의 lytA 유전자 서열 (FN549899.1)에 근거하여 특이성 프라이머를 설계하고 PCR 기술을 사용하여 폐렴 연쇄상구균(ATCC49619) 게놈에서 lytA 전체 서열 단편을 증폭하였으며, 클로닝 벡터 PGM T/lytA를 구축하였다. 서열 측정 후 M66 균주와 비교한 결과, 폐렴 연쇄상구균 ATCC49619 균주의 염기성 서열 내에 새로운 절단 위치 BamHⅠ가 존재하였다. BamHⅠ, HindⅢ 이중 효소 절단 후, 표적 유전자에 2개 작은 단편이 나타났다. 약 500 bp되는 작은 단편으로 재조합 발현 벡터 pET32a(+)/lytA′를 구축하고 IPTG 유도 후 등전점 용출법을 통하여 정제된 표적 단백질 LytA′을 얻었다. LytA′ 면역 실험용 작은쥐로 항체 역가(Titer)를 측정하고 Western blot 법으로 감정하였다. 서열 측정 결과, 폐렴 연쇄상구균 ATCC49619 균주와 M66 균주의 lytA 전체 유전자 서열의 상동성은 98%이고 보수성이 높으며, 염기가 서로 다른 부위는 하류 부분이었다. 그리고 BamHⅠ 효소 절단 위치가 444~450 bp 사이에서 나타났다. 구축하여 얻은 작은 단편 재조합 발현 플라스미드 pET32a(+)/lytA′를 BL21(DE3)에서 고효율적으로 발현시켜 정제 단백질 LytA′을 획득하였으며 면역 BALB/c 실험용 작은 쥐가 생성한 항체 효율 역가(Titer)를 계산한 결과, 1:32이었다. Western blot 법으로 검증한 결과, 해당 단백질은 비교적 우수한 항체 결합 활성이 있었다. 본 실험 결론으로 해당 단백질을 백신 및 약물 개발의 응용 관련 연구에 따른 기반을 마련하였다. |
