| 저자(한글) |
ZHOU, Jia-qing,WANG, Sheng-zhi,SONG, Cheng-yi,GAO, Bo,LI, Kui,QIAN, Li-li,CUI, Wen-tao,MOU, Yu-lian,LI, Bi-chun |
| 초록 |
Sleeping beauty(SB)는 Tc1/mariner 전이인자(transposon) 계열에 속한다. SB 전이인자와 서로 다른 전이효소(transposase)의 결합사용 및 같은 종류의 전이효소를 서로 다른 비율로 혼합하여 사용시 전이효율(transfection efficiency)을 연구하기 위해서 본 실험에서는 SB 진핵발현 재조합 벡터(eukaryotic expression recombinant vector) PT2-SV40-EGFP를 구축한 후 형광현미경과 실시간 형광정량 PCR(qRT-PCR)을 이용하여 돼지 태아섬유아세포계(porcine fetal fibroblasts cells, PEFs)의 형질전환 조건에 대한 최적화 연구를 진행하였다. 연구 결과, 서로 다른 전이효소와 전이인자를 10:1 비율로 혼합한 후 세포의 형질전환 효율은 유사한 것으로 나타났으나, 유전자 발현 수준은 비교적 큰 차이가 있었으며, 그중에서 SB100X 전이효소와 전이인자를 혼합 후 세포의 발현수준이 제일 높았다. 그리고 전이인자 PT2-SV40-EGFP 플라스미드와 SB100X 전이효소를 서로 다른 비율로 혼합한 후 세포의 형질전환 효율을 연구한 결과, 세포의 형질전환 효율은 비슷하였지만 발현수준은 뚜렷한 차이가 있었다. 그 중에서 1:1로 혼합한 그룹의 발현수준은 제일 높았는데, 5:1로 혼합한 그룹과 10:1로 혼합한 그룹의 약 50배인 것으로 나타났다. 본 실험에서는 SB 전이인자의 전이조건을 최적화하였는데, 이는 형질전환동물(transgenic animals)에 대하여 심층적 연구를 위한 참조를 제공하였다. |
