| 저자(한글) |
GAO, Hai-ling,JI, Jing,WANG, Gang,WU, Guang-xia,RONG, Fei,GUAN, Chun-feng,JIN, Chao |
| 초록 |
목적: 구기자나무(Lycium chinense Mill) 아스코베이트 퍼옥시데이스 유전자(ascorbate peroxidase, LmAPX)의 원핵발현 내 발현과 효소학 특성 및 효모균 내 항산화 능력을 연구하여 스트레스 유도에 대한 항산화 스트레스의 작용 메커니즘에 이론적 기초를 마련하는 것이다. 방법: LmAPX를 대장간균 BL21 내에 형질전환하여 이형 발현시키고, Ni 2+ 친화성 크로마토그래피 기법을 사용하여 재조합 단백질을 정제함과 동시에, 서로 다른 온도와 pH값 아래의 효소 활성을 연구하였으며, Lineweaver-Burk 이중역비례선법(double-reciprocal plot)으로 해당 효소의 Km, Vmax 값을 측정하였다. LmAPX를 효모균주 W303 내에 형질전환하여 H 2 O 2 와 NaCl 산화 스트레스를 받게 하였다. 결과: 해당 효소의 최적 온도와 최적 pH값이 각각 40℃, 6.5이었다. 아스코베이트 퍼옥시데이스(Ascorbic acid, AsA)의 농도가 과량일 때, H 2 O 2 의 Km, Vmax는 각각 0.17±0.02 mmol/L, 11.78±1.88 mmol/min·mg이었으며, H 2 O 2 농도가 과량일 때 AsA에 대한 Km와 Vmax는 각각 2.19±0.40 mmol/L, 58.82±3.51 mmol/min·mg이었다. LmAPX 유전자를 함유한 효모균주는 갈렉틴(galectin) 유도아래 8 mmol/L H 2 O 2, 100 mmol/L NaCl 배지 내 생장이 대조 그룹 내 생장보다 크게 양호하였다. 결론: LmAPX 단백질은 양호한 항산화성과 내염성을 갖고 있다. |
