| 저자(한글) |
CHEN, Huan-ji,LI, Qing-yun,YIN, Ye-xing,LIU, You-yan,GAN, Yu |
| 초록 |
본 논문에서는 적분 광밀도 방법(integral optical density method)을 이용하여 알칼리제네스(Alcaligenes sp.) 시안화물 분해효소(cyanide-degrading enzyme) 유전자가 대장균에서의 고효율 발현에 대하여 유도 조건 최적화를 진행하였다. 공정균(engineering bacteria) BL21(DE3)-pET28a-cdE의 발현 유도 조건을 최적화하여 목적 단백질의 생산량과 활성을 향상시켰다. 연구 결과, 재조합 대장균이 시안화물 분해 효소를 발현하는 최적 유도 조건은 28℃, 초기 균체 농도의 OD 600 값은 0.6, IPTG 농도는 0.8 mmol/L, 유도 시간은 12시간이었다. 또한, 연구 결과를 통하여 유도제의 첨가 농도가 외인성 단백질(exogenous protein)의 발현 수준에 뚜렷한 영향을 미치는 것으로 나타났다. 즉, 최종 농도가 0.8 mmol/L인 IPTG를 사용하여 12시간 동안 발현 유도된 후, 시안화물 분해 효소 단백질 흡수율은 143.27 mg/L, 비활성(specific activity)은 11,560 U/mg에 도달하였다. 유도제를 첨가하지 않은 군(group)에 비하여 재조합 단백질의 흡수율과 비활성은 각각 64배, 9배 향상되었다. |
