| 저자(한글) |
TIAN, Zhi-hai,MAO, Yun-xiang,KONG, Fan-na,LI, Chao,ZHANG, Xiao-nan,XU, Kui-peng |
| 초록 |
본 논문에서는 방사무늬 김(Pyropia yezoensis) 엽상체를 연마하여 DNA를 추출하는 조건을 최적화하였으며, 더 나아가 간단하고 신속하며 고효율적인 고속통과 연마 파손 방법을 구축하였다. 80초 동안 스틸 구슬(steel bead)로 연마할 때의 파손 효과는 액체 질소 연마의 파손 효과와 비슷하므로 80초를 연마 시간으로 설정하였다. 2가지 샘플 재료(건조한 것과 신선한 것), 4가지 연마 매개체[스틸 구슬 Φ2.3mm, 세라믹 구슬( ceramic bead ) Φ1mm, 규사(quartz sand) 0.270~0.707mm 및 유리구슬 Φ0.5mm], 3개 연마 매개체 부피 기울기(0.1, 0.2, 0.3mL)를 이용하여 연마 실험을 설계하였다. 연구 결과, 스틸 구슬의 파손 효과가 가장 우수하고 유리구슬의 파손 효과는 가장 낮았다. 규사와 유리구슬로 건조한 재료를 연마하여 얻은 DNA의 안전도가 가장 좋았으며, 4가지 연마 매개체로 신선한 재료를 연마하여 얻은 DNA는 분해 현상이 나타났다. 스틸 구슬과 세라믹 구슬로 건조한 재료를 연마하여 얻은 DNA의 분해 현상이 가장 심각하였다. 연마 매개체의 부피는 샘플의 파손 정도, DNA 수율 및 DNA 품질에 뚜렷한 영향을 미치지 않았다. 4가지 연마 매개체로 건조한 재료와 신선한 재료를 연마하여 추출한 DNA 순도는 비교적 높았다. 80초 동안의 연마 실험 결과, 스틸 구슬 그룹은 건조한 재료와 신선한 재료를 효과적으로 파손할 수 있고 얻은 DNA 순도와 수율이 비교적 높았지만, DNA 분해 현상이 나타났다. 이를 기반으로, 0.2mL 스틸 구슬을 통하여 건조한 재료와 신선한 재료를 연마하고, 5~40s의 연마 시간 기울기를 설치하였다. 실험 결과, 스틸 구슬은 5~40s 내에 건조한 재료와 신선한 재료 이 2가지 샘플 재료를 효과적으로 파손할 수 있다. 건조한 재료를 5~40s 연마할 경우, DNA에 뚜렷한 주요 밴드가 없고 DNA 수율이 연마 시간의 증가에 따라 향상하였으며 DNA 품질이 비교적 좋았다. 게다가 제한 효소 절단 실험에 적용될 수 있다. 신선한 재료를 5~40s 연마할 경우, DNA에는 뚜렷한 주요 밴드가 있고 DNA 수율이 뚜렷한 차이가 없었으며 DNA 품질이 비교적 좋았다. 또한, 제한 효소 절단 실험에 적용될 수 있다. 그러므로 본 논문에서는 건조한 재료와 신선한 재료의 2가지 샘플 재료를 파손하여 고품질 방사무늬 김 DNA를 제조하는 최적 조건은 연마 매개체가 0.2mL 스틸 구슬, 연마 속도가 6,800r/min, 연마 시간이 5초인 것으로 판단하였다. |
