| 초록 |
목적:혈관신생의 기능이 있는 $phVEGF_{165}$ 를 합성하고,토끼 뒷다리의 만성허혈모델에서 동맥내 주입과 근육내 주사를 통하여 혈관신생의 효과를 비교하고자 하였다. 대상과 방법:토끼의 좌측 뒷다리에 만성허혈모델을 만들고,대조군 6마리와 동맥내 주입군 7마리,근육내 주사군 5마리로 나누었다.HL60 세포주로부터 혈관내피세포성장인자 (VEGF)를발현하는 $phVEGF_{165}$ 를 제조하여,CHO 세포주에 유전자 전달감염시켜 western blot 분석을 하고,CPAE 세포주에 대한 증식효과를 분석하였다.만성허혈모델을 만든 2주째에 $phVEGF_{165}$ 500 $ mu textrm{g}$ /2.5 ml를 동맥내 주입군은 좌측 총장골동맥으로,근육내 주사군은 대퇴부 근육내 주사하였다. 유전자 주입 전과 주입 후 4주째에 혈관조영영상을 얻었다. 영상분석은 대퇴골의 수직이등분선과 만나는 혈관의 개수의 비를 구하였다. 유전자 주입 후 0,4,7,14,21일에 혈청 $VEGF_{165}$ 양을 측정하였다.통계분석은 Wilcoxon signed rank test로 하였다. 결과:유전자가 전달감염된 CHO 세포주의 배양배지에서 $VEGF_{165}$ 단백질 발현이 확인되었다. CPAE 세포주의 증식실험에서 흡광도가 대조군은 0.73 $ pm$ 0.043, $phVEGF_{165}$ 은 1.09 $ pm$ 0.015를 보여 증식효과가 있었다.토끼 뒷다리 만성허혈모델에서 유전자 치료 전후에 혈관 수의 변화가 대조군은 1.32 $ pm$ 0.13과 1.30 $ pm$ 0.07,동맥내 주입군은 1.42 $ pm$ 0.15와 1.59 $ pm$ 0.09, 근육내 주사군은 1.59 $ pm$ 0.27과 1.14 $ pm$ 0.12를 보였으나,p>0.05로서 유전자 치료전후에 두군 모두 통계적인 유의성은 없었다. 혈청내 VEGF는 동맥내 주입군에서는 유전자 주입 전 39.96 $ pm$ 1.08 pg/ml, 4일째 44.99 $ pm$ 2.13 pg/ml,1 주 째 48.18 $ pm$ 1.49 pg/ml,2주째 45.70 $ pm$ 3.77 pg/ml,3주째 46.54 $ pm$ 5.47 pg/ml로 증가를 보였다. 대조군과 근육내 주사군에서는 증가가 관찰되지 않았다. 결론:제작된 $phVEGF_{165}$ 가 실험실내에서 혈관내피세포의 증식에 효과가 있었다.토끼 뒷다리 만성허혈모델에서 $phVEGF_{165}$ 유전자 치료는 동맥내 주입과 근육내 주사 간에 혈관조영술과 혈청 VEGF 측정의 결과에서 차이가 없었다. |
