| 저자(한글) |
RUAN, Zheng,LI, Jie,LIU, Kai-wu,WANG, Lian-fang,HUA, Juan,HU, Xiao-ming,LIU, Jie,HUANG, Hai-jun |
| 초록 |
본 논문은 돼지 생식기 호흡기 증후군 바이러스(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)와 세포 수용체 사이의 상호 작용 메커니즘을 심층적으로 연구하기 위해 유전자 공학 방법으로 PAM 세포에서 클론하여 CD151와 CD163의 전체 길이 코딩 단편을 획득하였다. 그리고 Sal I와 Kpn I 내부 절단 효소로 회수하여 얻은 CD151(762 bp)와 CD163(3,333 bp) DNA 단편에 대하여 효소 절단(enzyme digestion)을 진행하여 pIRES2-EGFP-CD151와 pIRES2-EGFP-CD163 진핵 발현 벡터(eukaryotic expression vector)를 구축하였다. PCR 및 효소 절단 방법으로 검증한 후 재조합 플라스미드를 추출하여 세포를 형질전환하였다. 형광현미경으로 관찰한 결과, CD151와 CD163 유전자 단독 형질전환 혹은 CD151/CD163 공동 형질전환을 진행한 후, Marc 145 세포에서 강한 녹색 형광이 방출되었다. 웨스턴 블롯법(Western blot)으로 분석 결과를 심층적으로 검증한 결과, CD151와 CD163 단백질은 형질전환된 후 세포에서 고발현하였다. 돼지 CD151와 CD163 진핵 발현 벡터의 성공적인 구축은 CD151과 CD163이 PRRSV 세포를 감염시키는 과정에서 협동 작용을 심층적으로 연구하는데 물질적 기초를 제공하였다. 특히 PRRS 바이러스의 침입 및 숙주 식별에 대한 심층적 연구에 중요한 의미가 있다. |
