| 초록 |
소 인터페론-τ(bovine interferon-τ, bIFN-τ)는 배아 임신 식별 과정 중의 중요한 물질이며, 체외에 bIFN-τ 단백질을 재조합 발현하여 임신 식별 기전의 연구와 배아 공학 응용에 대한 중요한 의미를 가지고 있다. 본 연구의 목적은 대장균을 이용하여 bIFN-τ 단백질의 체외 재조합 발현 및 감정을 진행하는 것이다. PCR 증폭 방법을 통하여 bIFN-τ 유전자를 획득하고 pMD18-T 벡터 내에 클론하였다. 먼저 bIFN-τ 유전자는 BamH I와 Nde I 이중 효소로 절단한 후, 원핵 발현 벡터 pET-28a(+) 중에 연결되어 발현 플라스미드(pET-28a-bIFN-τ)를 구축하였다. 다음으로 pET-28a-bIFN-τ를 대장균 BL21(DE3) 내에 형질전환하였으며, IPTG를 이용하여 발현 유도를 진행하였다. 연구 결과, bIFN-τ 유전자의 서열 삽입 방향과 해독 틀(reading frame)은 pET-28a-bIFN-τ 가운데 정확하였다. 또 발현 산물 분석 결과, bIFN-τ 유전자는 대장균 BL21(DE3) 가운데 융합 발현을 실현하였으며 발현량은 균체 전체 단백질의 20.68%를 차지하였다. 최적화 후의 발현 조건은 해당 발현량이 28.84%에 도달하게 할 수 있다. 재조합 단백질은 주로 봉입체(inclusion body) 형식으로 존재하였으며, 정화와 감정을 통하여 발현 산물이 bIFN-τ 단백질인 것을 밝혔다. |
