| 저자(한글) |
TANG, Zi-zhong,LIU, Mo-yang,LI, Yu-fei,SUN, Rong,LIU, Shan,CHEN, Hui,HAN, Xue-yi |
| 초록 |
효소 활성이 높은 F-10 돌연변이주 엔도글루카나아제(endoglucanase) 유전자를 위치지정 돌연변이(site-directed mutagenesis)시키고 91 위치(K91E)와 369 위치(K369R)에 있는 아미노산를 돌연변이시켜, 돌연변이 플라스미드(K91E)를 구축하였다; (K369R)와 (K91E/K369R), 형질전환 대장간균 BL21에 대한 선별을 통하여 돌연변이 엔도글루카나아제 유전자 공학 균주 K91E, K369R와 K91E/K369R를 획득하였다. IPTG 유도 과정을 경과한 후 효소 성질에 대한 분리 정제 분석을 수행하였다. 실험 결과: 단백질의 상대적인 분자 질량이 53,000이고 돌연변이 전후의 최적 pH값이 변하지 않았으며, pH가 6.8이었다. 돌연변이체 K369R와 K91E/K369R의 최적 온도가 50℃이고 돌연변이체 K91E의 최적 온도가 40℃로서 크게 변했다. 효소의 비활성이 각각 202, 162.8, 77.9 U/mg이었고 원시효소(66U/mg)의 3.0배, 2.4배와 1.2배였다. 3개 돌연변이 효소의 열 안정성이 크게 향상되었고 온도가 70℃일 때 1시간 처리하면 원시효소의 활성이 급격히 낮아져 활성이 12%밖에 남지 않았다. 그러나 K91E의 잔여 활성이 36%이고 K369R의 잔여 활성이 30%, K91E/K369R 잔여 활성이 41%였다. 80℃ 온도에서 1시간 처리한 후 K91E의 잔여 활성이 여전히 22%였다. 본 연구에서는 효소 활성이 향상된 엔도글루카나아제 균주를 획득하였다. 그리고 분자 수준에서 엔도글루카나아제의 기능 및 응용에 기반을 마련하였으며, 효소 활성이 높은 분자의 기타 고발현 시스템 내 발현에 기초 재료를 제공하였다. |
