| 저자(한글) |
JIANG, Yu-dong,LI, Wen-si,YU, Chong,WANG, Lu,SUN, Xiao-xi,XI, Jiao-ya |
| 초록 |
심근을 탈세포화하여 심근세포 외 기질(extracellular matrix, ECM)을 획득할 수 있다. 이 기질은 공학 심근을 제조하는데 이상적인 생물 지지체 자료로 널리 인정되어 있다. 그러나 기존의 탈세포화 방법은 아직 단점이 있다. 본 연구에서는 전통적인 청정제(detergent)를 사용하여 탈세포화 방법을 개선하고 성능이 더욱 우수한 심근 ECM 박편(slice)을 제조하여 공학 심근 절편을 구축하였다. 바이브라톰(vibratome)을 사용하여 저융점 아가로스(low melting point agarose)에 포맷(embed)된 성체 쿤밍 흰쥐(Kunming white mice)의 심실 근육을 심장 횡축에 따라 300 μm 박편으로 절단하였다. 또한, 임의로 정상 대조군(normal control group), SDS 탈세포화군(0.1% SDS 처리) 및 개선된 탈세포화군(0.1% SDS와 0.5% Triton X-100 공동 처리)으로 나눴다. 전체 RNA(total RNA)와 전체 단백질 함량 분석, HE 염색, 면역형광염색 등 방법을 사용하여 각 군의 탈세포화 정도와 ECM 성분 유지 상황을 평가하였다. 개선된 탈세포화군 ECM, 쥐 배아 줄기세포 유래 심근세포(murine embryonic stem cell-derived cardiomyocytes, mES-CMs) 및 쥐 배아 섬유아세포(murine embryonic fibroblasts, MEFs)를 공동 배양하여 해당 생체 적합성(biocompatibility)을 검사하였다. 연구 결과, SDS 탈세포화군과 개선된 탈세포화군의 ECM에 잔류한 전체 RNA와 단백질 함량은 대조군보다 낮았다. HE 염색 결과, 개선된 탈세포화군의 핵질 제거는 SDS 탈세포화군보다 더욱 철저하였다. 개선된 탈세포화군은 콜라겐 IV(collagen IV)와 라미닌(laminin) 두 가지 ECM 핵심 성분의 발현량 및 분포가 정상적인 심근 조직에 근접했으나, SDS 탈세포화군 중에 해당 단백질이 뚜렷이 감소하고 분포가 혼란하였다. 그리고 mES-CMs와 MEFs는 개선된 탈세포화군 ECM 표면에서 12일 이상 동안 생존하고 내부로 전이할 수 있다. SDS와 Triton X-100 및 탈세포화 방법을 이용한 ECM 박편을 제조하는 것은 효과가 뚜렷하고 천연적 ECM 성분과 구조를 더욱 좋게 유지할 수 있어 우수한 생체 적합성을 지니고 있다. |
