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논문 기본정보
Characterization of D-amino acid oxidase and its mutants from Arthrobacter protophormiae
논문 개요
| 기관명 | NDSL |
|---|---|
| 저널명 | 微生物學報 = Acta microbiologica Sinica |
| ISSN | 0001-6209, |
| ISBN |
논문저자 및 소속기관 정보
| 저자(한글) | FENG, Li-wei,GUO, Jiao-jie,LI, Hui-xin,XU, Shu-jing,JU, Jian-song,ZHAO, Bao-hua |
|---|---|
| 저자(영문) | |
| 소속기관 | |
| 소속기관(영문) | |
| 출판인 | |
| 간행물 번호 | |
| 발행연도 | 2014-01-01 |
| 초록 | 【목적】Arthrobacter protophormiae(DSM 20168) 내 D-아미노산 산화효소(D-amino acid oxidase)의 효소학적 특성을 연구한다 【방법】PCR을 통하여 Arthrobacter protophormiae(DSM 15035과 20168)로부터 D-아미노산 산화효소 유전자 apdaao-1과 apdaao-2를 클로닝하였으며, 원핵 발현 벡터를 구축하였다. 플라스미드 pET-ApDAAO-2를 템플릿으로 하고, QuickChange Site-Directed Mutagenesis 기술을 이용하여 위치지정 돌연변이체(site-directed mutant)를 구축하였으며, 원핵 발현 및 정화를 거쳐 재조합 및 돌연변이체의 효소단백질을 얻은 후, 효소학적 특성을 분석하였다. 【결과】원핵 발현 및 정화를 통하여 2개 재조합 단백질과 4개 돌연변이체의 효소단백질을 성공적으로 얻었다. SDS-PAGE 검사 결과, 그 분자량은 모두 약 36 kDa였다. 효소학적 특성을 분석한 결과, ApDAAO-2와 돌연변이체 단백질 반응의 최적 온도는 30℃였다. ApDAAO-2과 T286A 반응의 최적 pH 범위는 7.0-11.0, 기타 돌연변이체는 8.0-11.0이었다. ApDAAO-2과 돌연변이체는 모두 비교적 광범위한 기질 특이성(substrate specificity)을 갖고 있었으며, T256K의 최적의 기질이 D-Phe인 외, 기타는 모두 D-Met였다. 동역학적 파라미터를 측정한 결과, 2차 겉보기 상수 k cat /K m 로 표시할 때, 기질 D-Met 혹은 D-Phe에 대한 ApDAAO-2과 4개 돌연변이체의 k cat /K m 값은 모두 ApDAAO-1과 pKDAAO보다 몇 배 이상 높았다. 【결론】ApDAAO-2 및 돌연변이체는 ApDAAO-1과 pKDAAO보다 더 광범위한 기질 특이성과 비교적 높은 촉매 효율을 갖고 있었으며, 일정한 상업 응용 가치를 갖고 있었다. |
| 원문URL | http://click.ndsl.kr/servlet/OpenAPIDetailView?keyValue=03553784&target=NART&cn=NART75838307 |
| 첨부파일 |
추가정보
| 과학기술표준분류 | |
|---|---|
| ICT 기술분류 | |
| DDC 분류 | |
| 주제어 (키워드) | Arthrobacter protophormiae,D-amino acid oxidase,site-directed mutagenesis,k lt,sub gt,cat lt,/sub gt,/K lt,sub gt,m lt,/sub gt,. Arthrobacter protophormiae,D-아미노산 산화효소,위치지정 돌연변이,k lt,sub gt,cat lt,/sub gt,/K lt,sub gt,m lt,/sub gt |