| 저자(한글) |
HU, Chuan-ming,YU, Hao,TANG, Hong-zhi,WU, Geng,XU, Ping |
| 저자(영문) |
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| 소속기관 |
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| 소속기관(영문) |
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| 출판인 |
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| 간행물 번호 |
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| 발행연도 |
2014-01-01 |
| 초록 |
[목적] 대장균으로부터 니코틴 분해 핵심인 6-히드록시-3-숙시닐 피리딘 모노산소첨가효소(6-hydroxy-3-succinoyl-pyridine monooxygenase) 유전자 hspB를 클론 발현하고 HspB 단백질을 정화(purify) 재조합하여 결정화 조건을 기초적으로 연구한다. [기법] 슈도모나스 푸티다(Pseudomonas putida) S16 유전체로부터 hspB 유전자를 PCR로 증폭하고 재조합 발현 벡터 pET28a-hspB를 구축하며 E.coli BL21(DE3) 가운데서 발현을 유도한다. 또한, 친화성 크로마토그래피( affinity chromatography) 및 겔 여과 크로마토그래피(gel filtration chromatography)를 이용하여 단백질을 정화하고 재조합한다. 현적 확산법(hanging drop diffusion method)을 이용하여 HspB 단백질에 대한 결정화 조건 선별 및 최적화를 진행한다. [결과] 본 논문에서는 재조합 플라스미드(plasmid) pET28a-hspB를 구축하였으며 결정화 순도에 도달한 HspB 단백질을 정화하여 얻었다. 결정화 조건의 조기 선별 및 최적화를 한 후, HspB 단백질 결정체를 배양할 수 있는 조건을 얻었다. 즉, 0.2mol/L NaCl, 0.1mol/L HEPES, pH 7.5, 1.1mol/L (NH 4 ) 2 SO 4 , 4℃이고 종결정(seed crystal)을 첨가하는 것이다. [결론] HspB 단백질 정화 체계의 구축 및 결정화 조건의 조기 연구는 구조적 생물학 각도에서 HspB 구조와 기능의 관계를 연구하고 HspB 촉매 효율을 유전조작의 직접적인 전환으로 향상시키는데 기초를 마련한다. |
| 원문URL |
http://click.ndsl.kr/servlet/OpenAPIDetailView?keyValue=03553784&target=NART&cn=NART75840203 |
| 첨부파일 |
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