| 저자(한글) |
LI, Er-han,PENG, Si-lu,LI, Han-cuan,XU, Yan-hong,WANG, Xiao-lan,ZHU, Du,YANG, Hui-lin |
| 초록 |
[목적] 바실러스 아밀로리쿠에파시엔스(Bacillus amyloliquefaciens) α-아밀라아제(α-amylase)의 대장균에서의 고효율적 발현을 실현하고, 효과적인 투석 복원(dialysis renaturation, 투석에 의한 탈변성) 방법을 건립하여, 활성을 갖춘 재조합 아밀라아제를 얻고자 한다. [방법] 바실러스 아밀로리쿠에파시엔스 DSM7 유전체 DNA를 템플릿으로 하고, PCR기법을 도입하여 신호 펩타이드가 없는 α-아밀라아제 구조 유전자를 증폭하여 얻어서 pET-22b(+)에 복제하고, 대장균 E.coli BL21(DE3)에 형질주입한 후 IPTG로서 유도 발현한다. SDS-PAGE기법으로 재조합 단백질의 발현상황을 검측하고, 투석법(dialysis renaturation process)을 사용하여 봉입체(inclusion body) 복구 작업을 진행하고 효소활성을 검측한다. [결과] 재조합 단백질을 성공적으로 발현하였는데, 그것의 상대적 분자량은 약 54.8kDa이었다. 또한 봉입체의 복구에도 성공하였는데, 그 복구효율은 22.78%이었다. 추가로 재조합 α-아밀라아제 효소활성은 102.4U/mL이었다. [결론] 바실러스 아밀로리쿠에파시엔스 α-아밀라아제의 대장균에서의 고효율적 발현을 실현하였고, 봉입체는 투석법을 이용하여 성공적으로 복구되었으며, 촉매 활성을 갖춘 재조합 아밀라아제를 얻었다. |
