| 저자(한글) |
Sung, Hee-Kyung,Moon, Keum-Ok,Choi, Ki-Won,Choi, Kyung-Hwa,Hwang, Kyung-Ju,Kim, Myo-Jung,Cha, Jae-Ho,부산대학교 미생물학과,부산대학교 미생물학과,부산대학교 미생물학과,부산대학교 미생물학과,부산대학교 미생물학과,인제대학교 식품생명과학부,부산대학교 미생물학과 |
| 초록 |
당 분해효소의 family 32 (GH32)에 속하는 $ beta-fructofuranosidase$는 3차구조를 근거로 볼 때 W(L/M)(C/N)DP(Q/N), FRDPK, 그리고 ECP(D/G) 부위를 포함하는 세 군데의 보전적인 영역을 가지고 있다. 이러한 $ beta-fructofuranosidase$ family에 속하는 Microbacterium sp. AL-210 유래 levan fructotransferase (LFTase)의 보전적인 산성 아미노산들의 역할이 특정위치 돌연변이법으로 검사되었다. 각각의 돌연변이체는 대장균인 E. coli BL21 (DE3)균주에서 발현되어 대량 생산되었고, 금속 친화 크로마토그래피법과 FPLC법으로 순수 정제되었다. wild-type LFTase의 효소의 활성은 0.74 unit 인 반면 네 개의 돌연변이체인 D63A, D195N, E245A, E245D 각각은 specific activity를 측정해 본 결과 원 균주와 비교해서 약 100배 정도 감소한 효소활성을 보여 주었다. 이로써 아미노산 변형의 target이 되었던 Asp-63, Aps-195, 그리고 Glu-245가 모두 효소 활성 및 기질과의 결합에 상당히 중요한 역할을 하고 있음이 판명되었다. 이러한 세 부위의 산성 아미노산들은 inulinase, levan fructotransferase와 invertase에 모두 보전적으로 위치 하므로 이들은 $ beta-fructofuranosidase$ family내 에서 공통된 역할을 할 것으로 사료된다. |
