| 저자(한글) |
ZHU, You-cong,HE, Jun,YOU, Xiao-xing,ZHU, Cui-ming,LI, Ran-hui,ZENG, Yan-hua |
| 초록 |
[목적] 인간 요도 상피세포(SV-HUC-1) T7 파지 디스플레이 cDNA 라이브러리를 구축하여 인간 요도 상피세포와 생식관 감염 병원체의 상호 작용을 연구하는데 기초를 마련한다. [방법] Trizol 시약을 이용하여 SV-HUC-1 세포 총 RNA를 추출하였으며 mRNA를 분리정화하였다. 역전사 합성을 거쳐 그 이중사슬 cDNA를 얻었으며, 이중사슬 cDNA 말단에 정방향의 EcoRⅠ/HindⅢ 점성 말단을 첨가하고, 다음 200 bp 이상의 이중사슬 cDNA 조각을 수집 및 정화하여 T7 파지 벡터에 연결하였으며, 체외 패키징 후 BLT5403 숙주균에 전환하여 T7 파지 디스플레이 cDNA 라이브러리를 성공적으로 구축하였다. [결과] 라이브러리를 증폭한 후, 파지반(bacteriophage plaque) 실험으로 그 저장량을 검출하였는데 결과는 1.2×10 6 pfu/cm 3 이었다. PCR을 이용하여 임의로 추출한 용균반(plaque)을 감정하였으며 그 재조합 비율을 계산한 결과, 93.75%이었고 삽입 조각은 모두 200 bp보다 컸다. [결론] SV-HUC-1 세포 T7 파지 디스플레이 cDNA 라이브러리를 성공적으로 구축하였으며, 비뇨생식관 감염 병원체와 인간 요도 상피세포의 상호작용을 한층 더 연구하는데 사전 실험 기초를 마련하였다. |
