| 저자(한글) |
FENG, Meng-die,HONG, Yu,XU, Ze-yang,MAO, Pu-jia,FENG, Jin,ZHAO, Ji-hua,YANG, Hong-wen,SONG, Wu-zhan,HUANG, Fen,JING, Shen-rong,ZENG, Wei-kun |
| 초록 |
클로람페니콜 아세틸전달효소(chloramphenicol acetyltransferase, CAT)를 리포터 유전자(reporter gene)로 하고, pCAT2 프로모터 탐침 벡터를 구축하여 Pseudomonas aeruginosa 유전자 라이브러리로부터 프로모터를 선별하였다. Sau3AⅠ효소에 의해 절단된 Pseudomonas aeruginosa의 유전체는 조각(500-1,500 bp)을 회수하고 또 pCAT2 벡터와 연결되어 Pseudomonas aeruginosa의 유전체 라이브러리를 구축하였으며, PCR로 라이브러리의 다양성을 감정하였다. 클로람페니콜(10μg/mL)과 카나마이신(kanamycin)(50μg/mL)의 이중 저항 평판을 이용하여 16주의 양성 균주를 선별하였으며, PCR, 시퀀싱, NCBI 비교법으로 감정하였다. 구축한 유전자 라이브러리의 저장 용량은 50,000개에 달할 수 있으며, 유전자 전체길이의 3.5배를 커버링할수 있고, 삽입률은 90%에 달하며 비교적 강한 랜덤성(randomness)을 갖고 있다. 이중 저항 평판을 이용하여 프로모터를 선별하였으며, 선별 효과는 최고로 96%에 달하였다. Pseudomonas aeruginosa 유전체 중의 9개 프로모터를 얻었으며 상동성은 99% 이상에 달하였고, 그 활성에 대한 초기 감정 결과는 Pseudomonas aeruginosa 유전자 발현 조절의 심층 연구에 기초를 마련하였다. |
