| 저자(한글) |
SONG, Fei-fei,LI, Meng-nan,CHEN, Fan-bing,GUAN, Xiong,HUANG, Zhi-peng |
| 초록 |
영양생장기 살충 단백질(vegetative insectcidal protein, Vip)은 바실러스 튜링겐시스(Bacillus thuringiensis, Bt)가 영양생장기인 지수기 중기로부터 안정기에 생산하는 단백질이다. 바실러스 튜링겐시스 내 Vip3Aa단백질의 고효율 발현조건을 얻고자, 본 연구에서는 직교 시험을 이용하여 대장균(Escherichiacoli)의 재조합 유전자공학용 세균 BL21-pCzn1-Vip을 유도하는 과정에 유도제 농도, 유도 시간과 유도 온도가 Vip3Aa단백질의 발현량에 미치는 영향을 종합 고찰하였다. 연구 결과, 해당 공학용 세균 내 표적 단백질의 최적의 발현유도 조건은 다음과 같았다. 즉 유도 온도 21℃, 유도 시간 8시간, 유도제[이소프로필-β-d-시오갈락토시드(isopropyl-β-d-thiogalactoside, IPTG)] 농도 200 μg/mL였다. 시각화 분석을 통하여, 표적 단백질의 발현량에 영향을 미치는 가장 주요한 요소가 유도 온도이고, 그 다음으로 유도 시간이며, 유도제의 농도가 가장 작은 영향을 미친다는 것을 발견하였다. 분산 분석 결과, 유도 온도의 P값 0.05였는데, 이는 시각화 분석 결과와 일치하였다. 최적화 후의 발현유도 조건에서 배양하였을 때, 표적 단백질의 최대 발현량이 총 단백질의 27.6%를 차지였는데, 이는 일반 유도기법의 2.3배였다. 본 연구는 고순도 Vip3Aa단백질을 대량 제조하고 이론 연구와 실제 응용을 강화하는데 기초 데이터를 제공하였다. |
