| 저자(한글) |
WU, Song-qing,LIU, Zhao-xia,SU, Wei-chao,WANG, Guan-dong,CHEN, Hui-cheng,WU, Zhi-mao,GUAN, Xiong,ZHANG, Ling-ling |
| 초록 |
mapk-like는 신호전달과 관련되는 유사분열 활성 촉진 단백질 키나아제(mitogen-activated protein kinase) 패밀리 유전자로, 선충(Caenorhabditis elegans) 내 Cry 독소 저항에 참여하는 p38MAPK과 비슷한 모티프를 갖고 있다. 그러나 해당 유전자가 이집트 숲모기(Aedesaegypti)의 바실러스 튜링겐시스(Bacillus thuringiensis) 저항과정에 참여하는지는 더 한층 검증할 필요가 있다. RNA 검증에 필요한 dsRNA를 간단하고 대량으로 얻고자, 본 연구에서는 RNaseⅢ 결실형 대장균(Escherichia coli) HT115의 고효율, 저원가 등 장점을 이용하고, 이미 시퀀싱한 유사분열 활성 촉진 단백질 키나아제 패밀리 유전자인 mapk-like 유전자의 서열에 근거하여, 특이성 프라이머를 설계하였으며, PCR을 통하여 크기가 361 bp인 표적 조각 mapk-like(GenBank 등록번호: AAEL003728-RA)을 증폭시킨 후, 이를 클론 벡터 pMD18-T에 연결시켰다. 제한효소XbaⅠ과 XhoⅠ를 이용하여, 해당 조각을 원핵 발현 벡터 pLitmus28i의 2개 T7 촉진제 사이에 삽입하였으며, 표적 이중가닥의 형성을 유도할 수 있는 RNA(dsRNA)의 원핵 발현 재조합 벡터 pLitmus28i-mapk-like을 성공적으로 구축한 후, 이를 대장균 HT115에 형질도입시켰다. IPTG 유도를 통하여, 1 mL 균액의 dsRNA 생산량이 1.18 μg에 달하게 하였으며, 전기영동을 통하여 밴드가 뚜렷하고 품질이 양호하다는 것을 검출할 수 있었다. 이밖에, 키토산(chitosan)과 dsRNA를 결합하여 나노미세입자를 형성하였다. 전기영동을 통하여 상청액을 검출한 결과, 키토산은 양호한 응집 효과를 갖고 있었으며, 나노스피어는 dsRNA가 사료의 아가로오스로부터 유리되는 것을 효과적으로 방지함으로써 dsRNA의 안정성을 향상시킬 수 있었다. 이집트 숲모기 유충은 mapk-like 유전자의 dsRNA를 섭취한 후, 상대 전사 발현 수준이 65.55%로 되었으며, 발현량이 뚜렷하게 하향조절되고 급여 효과가 양호하였다. 연구 결과는 관련 저항 유전자를 심층적으로 분별하는데 도움이 되며, RNA 침묵에 기반한 모기 매개 질환 예방 관련 연구 시스템을 구축하는데 기초 데이터를 제공하였다. |
