Expression and characterization of surface-displayed sucrose:sucrose 1-fructosyltransferase on Yarrowia lipolytica cells
기관명 | NDSL |
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저널명 | 微生物學通報 = Microbiology |
ISSN | 0253-2654, |
ISBN |
저자(한글) | LI, Hui-juan,SHAO, Xian-xiang,SUN, Yun-peng,GAO, Jun,DING, Rui,ZHANG, Bi-ning,ZHANG, Zhi-shan,CHI, Zhen-ming |
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출판인 | |
간행물 번호 | |
발행연도 | 2014-01-01 |
초록 | [목적] 자당:자당-1-프럭토실트란스페레이스(sucrose:sucrose 1-fructosyltransferase)는 촉매제 역할을 하여 1 분자 자당 위의 프럭토실을 다른 하나의 자당 분자 위에 전이시키며 더 나아가 1-케스토오스(1-Kestose) 및 포도당을 형성한다. 프럭토올리고당(fructooligosaccharide) 중에 1-케스토오스의 활생균 활성이 가장 높다. 본 연구는 해당 효소를 효모균 세포 표면에 전시하며 이것을 1-케스토오스의 제작에 적용한다. [기법] 상추(Lactuca sativa)로 부터 유래한 자당:자당-1-프럭토실트란스페레이스 유전자를 효모 세포 표면 전시에 적용되는 발현 벡터 위에 클론하며 야로위아 리포리티카(Yarrowia lipolytica) 가운데서 이형 발현을 진행한다. 발현된 효소를 해당 세포 표면에 전시하고 자당을 기질로 하여 표면 전시된 자당:자당-1-프럭토실트란스페레이스의 성질을 연구한다. [결과] 면역 형광 실험 결과, 자당:자당-1-프럭토실트란스페레이스는 효모균의 세포 표면에 전시되었다. 고성능 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography) 결과를 통하여 효모균 세포 표면에 전시된 효소가 전이 효소의 촉매 활성을 가지는 것으로 나타났다. 해당 효소의 최적 작용 온도, 최적 작용 pH는 각각 45°C, 7.5이었으며 효소의 촉매 활성은 Zn 2+ 및 Cu 2+ 로부터 억제를 받고 Ca 2+ 에 의해 활성화되었다. 이 효소가 7차례 중복으로 사용된 후의 효소 활성은 50% 내려갔다. 표면에 전시된 자당:자당-1-프럭토실트란스페레이스를 3% 자당과 혼합하여 40°C 조건에서 30분 동안 배양한 후, 생산한 1-케스토오스 함량은 최대로 20.8 mmol/L에 달하였다. [결론] 자당:자당-1-프럭토실트란스페레이스는 야로위아 리포리티카 가운데서 성공적으로 발현되었고 해당 세포 표면에 전시되었다. 생화학적 연구 결과를 통하여 해당 재조합 단백질이 프럭토실트란스페레이스 활성을 지니며 케스토오스의 생성을 촉매하는 것으로 나타났다. 표면에 전시된 자당:자당-1-프럭토실트란스페레이스는 전세포 촉매제로서 1-케스토오스의 제작에 적용될 수 있다. |
원문URL | http://click.ndsl.kr/servlet/OpenAPIDetailView?keyValue=03553784&target=NART&cn=NART75843264 |
첨부파일 |
과학기술표준분류 | |
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ICT 기술분류 | |
DDC 분류 | |
주제어 (키워드) | Sucrose:sucrose 1-fructosyltransferase,Surface-display,Yarrowia lipolytica,1-Kestose,Enzyme characterization,자당:자당-1-프럭토실트란스페레이스,표면 전시,야로위아 리포리티카,1-케스토오스,효소학적 특성 |