| 저자(한글) |
PU, Jing,WANG, Rui,YAO, Ming-dong,HE, Zhong-jie,ZHAO, Ming,MENG, Yao |
| 초록 |
혈청 중 크레아티닌(creatinine)의 농도를 측정하는 것은 임상에서 신장 기능을 진단하는 중요한 지표이다. 효소 결합법을 이용한 측정 과정에서 핵심효소--사르코신 산화효소(sarcosine oxidase, SOX)의 질량을 제어하는 것은 우선 해결해야 할 중요한 문제이다. 본 논문에서는 젖당(lactose)을 이용하여 재조합 사르코신 산화효소(recombinant sarcosine oxidase, r-SOX) 유전자가 E.coli에서 과발현되는 것을 유도하였다. 300L 발효탱크로 발효 배양한 후 균체 최종 밀도 OD 600 값은 22, 균체 습중량은 30g/L에 달하였으며, 균체 활성은 20U/g이었다. r-SOX 발현량은 균체 수용성 단백질의 약 25% 차지하였다. 균체 파쇄액은 55℃ 선택성 열 변성 처리와 Ni-Sepharose FF 크로마토그래피의 두 단계 정화, 도데실 황산 나트륨 폴리아크릴아미드 겔 전기영동(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)을 거쳐 분석한 효소의 순도는 97% 이상이고, 비활성은 25U/mg에 달하였으며, 정화 배수는 14.4이고, 활성 복원율은 92.4%이었다. 정화한 효소에 대해 SDS-PAGE와 분자 선별 크로마토그래피법으로 측정한 결과, 그 분자량은 각각 53kD와 55kD이었는데 이것은 해당 효소 구조가 단일 펩타이드 사슬이라는 것을 제시한다. 정화한 효소액과 동결건조 분말은 황색을 나타냈으며, 트리클로로아세트산(Trichloroacetic acid, TCA)과 열변성 처리 결과, 락토플라빈(lactoflavin)과 공유결합의 방법으로 결합하였다. 이 외에 해당 효소의 안정성과 그중의 간섭 효소인 카탈라아제에 대해 한층 더 관찰하였다. 이상으로부터 얻은 연구 결과는 해당 효소의 개발과 이용에 기초를 마련하였다. |
