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논문 기본정보
cDNA cloning, sequence analysis and prokaryotic expression of a serine protease from the midgut of Heliothis viriplaca(Lepidoptera: Noctuidae)
논문 개요
| 기관명 | NDSL |
|---|---|
| 저널명 | 昆蟲學報 = Acta entomologica Sinica |
| ISSN | 0454-6296, |
| ISBN |
논문저자 및 소속기관 정보
| 저자(한글) | ZHOU, Xiao-qun,GAO, Yan-ling,ZHAO, Kui-jun,FAN, Dong |
|---|---|
| 저자(영문) | |
| 소속기관 | |
| 소속기관(영문) | |
| 출판인 | |
| 간행물 번호 | |
| 발행연도 | 2014-01-01 |
| 초록 | 【목적】본 연구는 Heliothis viriplaca 중장(midgut)에서 세린 프로테아제(serine protease, SP) 유전자의 cDNA 서열을 복제한 다음 원핵 발현시킨 후, 획득한 단백질을 정제 및 복원한 후의 활성을 측정하고자 하였다. 【기법】RT-PCR과 cDNA 말단 신속 증폭법(rapid amplification of cDNA ends, RACE)을 활용하여 Heliothis viriplaca 유충 중간창자(midgut)의 세린 프로테아제 cDNA 전구간 서열을 복제하였고 대장균(Escherichia coli) 발현 시스템을 이용하여 발현시켰다. 재조합 단백질을 정제한 후, 구배 투석법(gradient dialysis technique)을 사용하여 복원한 다음 BApNA를 기질로 하여 활성을 측정하였다. 【결과】복제하여 획득한 Heliothis viriplaca 중장의 세린 프로테아제 유전자를 HvSP(GenBank 등록번호: JX866720)로 명명하였다. 본 유전자의 전구간 길이는 880bp였고 개방형 해독특의 길이는 762bp였으며 254개 아미노산을 암호화하였다. 예측 분자량과 pI값은 각각 26.9kDa와 9.49였다. HvSP로부터 도출한 아미노산 서열과 나비목(lepidopteran) 곤충 SP 아미노산 서열의 일치성은 52%~95% 사이였고 이 중 왕담배나방(Helicoverpa armigera)(GenBank 등록번호: CAA72962) 아미노산 서열과의 일치성은 가장 높은 95%에 도달하였다. 재조합 벡터 pET21b-HvSP를 성공적으로 구축하여 원핵 발현시킨 후 Western-blot 분석 결과, 목표 단백질인 것으로 판정되었다. 단백질 가용성 분석을 통해 재조합 단백질은 봉입체(inclusion body)인 것을 발견하였다. Glycine-NaOH 완충 용액의 pH가 10.0일 경우, 복원한 재조합 단백질의 활성은 가장 높은 35.74U/mL에 도달하였다. 【결론】본 연구는 Heliothis viriplaca 체내로부터 새로운 세린 프로테아제 유전자를 획득하였고 원핵 발현시킨 후의 재조합 단백질을 변성, 정제, 복원한 후 활성이 있었다. 본 결과는 나비목 곤충 체내에서의 세린 프로테아제 생리기능을 심층 연구하는데 기초를 마련하였다. |
| 원문URL | http://click.ndsl.kr/servlet/OpenAPIDetailView?keyValue=03553784&target=NART&cn=NART72160470 |
| 첨부파일 |
추가정보
| 과학기술표준분류 | |
|---|---|
| ICT 기술분류 | |
| DDC 분류 | |
| 주제어 (키워드) | Heliothis viriplaca,serine protease,cDNA cloning,prokaryotic expression,recombinant protein,enzyme activity,Heliothis viriplaca,세린 프로테아제,cDNA 복제,원핵 발현,재조합 단백질,효소 활성 |