| 초록 |
본 실험은 GyrB 유전자의 특이성 프라이머를 이용하여 퇴적 환경(Sediment environment of aquaculture)의 아에로모나스(Aeromonas) 세균에 대한 실시간 형광 정량 PCR 검측 방법을 구축하였다. 기존에 알려진 농도를 가진 아에로모나스를 멸균 상태의 퇴적물 샘플에 첨가하여 퇴적물 샘플을 시뮬레이션하였다. 퇴적물의 DNA 추출 방법, 특이성 프라이머, 기준 곡선 모듈을 선택하고 최적화하였으며 퇴적 환경에서 아에로모나스 세균을 정확하게 검측하는 실시간 형광 정량 PCR 방법을 구축하였다. 그리고 해당 방법의 특이성, 민감성 및 중복성을 감정하였다. 실험 결과, 개선한 라이소자임-SDS 온화성 분해법을 사용하여 퇴적물 DNA를 추출하고 GyrB 유전자 단편을 증폭하는 IAF와 AR를 특이성 프라이머로 사용하며, 직접 시뮬레이션을 진행한 퇴적물 샘플의 DNA를 표준물질로 하여 기준 곡선을 구축한다면, 퇴적 환경의 아에로모나스 세균을 정량적으로 검측할 수 있는 실시간 형광 정량 PCR 방법을 구축할 수 있었다. 돌기해삼 양식못 퇴적질의 아에로모나스균 속, 서로 다른 종에 속하는 세균을 검측할 수 있는 해당 방법은 민감성, 특이성 및 정확성 등 특징을 가지고 있으며 검출 효율이 10 3 CFU/g에나 도달할 수 있었다. 통계적 분석 결과, 변이 계수가 0.21%~0.80%이고 모두 5%보다 작았다. 분석 결과에서 우리는 해당 방법의 중복성이 우수하다는 것을 알 수 한다. |
