| 저자(한글) |
ZHAO, Li,JIAO, Yun,YANG, An-ning,CAO, Cheng-jian,KONG, Fan-qi,LIU, Xian-mei,YANG, Xiao-ling,JIANG, Yi-deng |
| 초록 |
본 논문에서는 miR-124가 호모시스테인(homocysteine, Hcy)으로 유발된 죽상동맥경화증에서의 작용 및 그 프로모터 영역(promoter region) DNA 메틸화 조절 메커니즘을 토의하였다. 먼저 ApoE -/- 쥐에게 메티오닌(methionine) 함량이 높은 음식을 16주간 주어 고호모시스테인혈증(hyperhomocystinemia) 모델을 복제하였으며, 정상 대조군(C57BL/6J 쥐 정상적으로 음식 먹음) 및 ApoE -/- 대조군(ApoE -/- 쥐 정상적으로 음식 먹음)을 설치하였다. HE 및 오일 레드 오 염색(oil red O staining) 방법을 이용하여 각 그룹 쥐의 죽상동맥경화 정도를 관찰하였고, 생화학적 분석 방법을 이용하여 각 그룹 쥐 혈청 Hcy와 혈액 지질 수준을 검사하였다. 거품세포(foam cell) 모델을 복제한 후, 오일 레드 오 염색 방법을 이용하여 모델을 성공적으로 복제하는지를 확인하였다. 또한, 각각 0, 50, 100, 200, 500 μmol/L Hcy 및 50 μmol/L Hcy+10 μmol/L 5-아자시티딘(5-azacytidine, 5-AZC)을 사용하여 세포를 간섭하였다. 실시간 정량 PCR(RT-qPCR) 방법을 이용하여 각 그룹 쥐 대동맥과 거품세포에서의 miR-124 발현 변화를 검사하였으며, nMS-PCR(Nested landing methylation specific PCR) 방법을 이용하여 각 그룹 쥐 대동맥과 거품세포에서의 miR-124 프로모터 영역 DNA 메틸화 수준을 검사하였다. 동시에 세포수준에서 DNA 메틸화 억제제 AZC가 miR-124 프로모터 영역 DNA 메틸화 수준과 발현에 미치는 영향을 관찰하였으며, 거품세포 오일 레드 오 염색 방법을 이용하여 miR-124 메틸화 변화가 세포지질 농축에 주는 영향을 관찰하였다. 연구 결과, ApoE -/- 대조군에 비하여 메티오닌 함량이 높은 그룹의 쥐 혈청 Hcy 수준은 뚜렷이 높아졌으며(P 서로 다른 농도의 Hcy를 주어서 거품세포를 자극시킨 후, miR-124의 발현 수준은 내림 추세로 나타났지만, miR-124 프로모터 영역 DNA 메틸화 수준은 점차 높아졌고 Hcy 농도의 증가와 더불어 해당 변화가 더 뚜렷해졌으며 용량 의존관계를 나타냈다(P 결론적으로, miR-124 발현 감소는 Hcy에 의해 주상동맥경화를 유발하는 과정에서 중요한 작용을 발휘할 수 있으며, miR-124 프로모터 영역에서의 높은 메틸화 변화는 그 발현 감소의 중요한 메커니즘일 가능성이 있다. |
