| 초록 |
p SP-CS(phosphorylatable short peptide coupled chitosan)로 인간 인터류킨-1 수용체 대항물질(interleukin-1receptor antagonist protein, IL-1RA)과 인간 인슐린 유사 성장인자 1 유전자(insulin-likegrowth factor-1, IGF-1)의 공동 형질전환을 유도하여, 체외에서 배양한 토끼 관절의 연골세포에 미치는 작용을 탐구하였다. p SP-CS와 공동 발현 플라스미드 pBudCE4.1-IL-1RA+IGF-1, 단일 유전자 발현 플라스미드 pBudCE4.1-IL-1RA, pBudCE4.1-IGF-1과 빈 플라스미드 pBudCE4.1을 결합하여 p SP-CS/pDNA 복합물을 제조하고, 체외에서 분리 배양한 정상 토끼의 1차 관절연골 세포를 형질전환하였다. ELISA법으로 IL-1RA와 IGF-1의 발현을 검측하고, p SP-CS 형질전환 효율을 계산하였다; CellCounting Kit-8(CCK-8)법을 사용하여 연골세포의 증식 활성을 분석하였다; 유세포분석기를 이용하여 연골세포의 사멸을 검측하였다; 정량 PCR법으로 연골세포의 기질 금속 단백질분해효소 억제제-1(matrixmetallo-proteinase inhibitor-1, Timp-1), 기질 금속 단백질분해효소-3(matrixmetalloproteinase-3, Mmp-3), 아그레칸(Aggrecan) 유전자의 발현을 검측하였다. 실험 결과, 형질전환 게놈의 IL-1RA와 IGF-1 발현 수준은 비교적 높았다; 각 형질전환 게놈은 세포 증식을 촉진하고 세포 사멸을 억제하며, Mmp-3 유전자의 발현을 하향 조절하고, Timp-1과 Aggrecan 유전자 발현을 상향 조절한다. 동시에 이중 게놈은 단일 게놈에 비해 뚜렷한 장점을 갖고 있었다(P 실험 결과, p SP-CS는 외인성 유전자를 연골세포에 도입하며 대량적으로 발현시킬 수 있다. IGF-1과 IL-1RA의 협동 작용은 체외에서 배양한 연골세포의 생물 활성을 뚜렷하게 향상하였으며, 앞으로 p SP-CS가 유도하는 다중 유전체를 이용하여 연골 손상을 치료하는데 기반을 마련하였다. |
