| 저자(한글) |
Cho, Young-Hwa,Choi, Ye-Jin,Yun, Jung-Hee,Kim, Nam-Hee,Choi, Mi-Ra,Choi, Young-Kook,Kim, Kyung-Hee,Lee, Young-Ill,Lee, Beom-Jun,Park, Kee-Rang |
| 초록 |
AAV는 매우 안전하고 효율적인 유전자전달방법으로 인정되어 왔다. 그러나, AAV가 가진 생물의약품으로서 단점은 효율적이고 재현성 높은 생산법이 취약하고, 또한 다양한 혈청형을 간단한 한 가지 공통적 방법으로 신뢰성 있게 정량하는 방법이 개발되어야 하는 것이다. 따라서, 본 연구에서는 AAV2와 아데노바이러스를 동시에 감염하는 종래의 생산법에 의한 효율성과 새로운 생산법, 즉 AAV2 감염 후 pHelper 플라스미드를 transfection 하는 방법을 통한 생산효율성을 비교하였고, HEK293과 293T를 생산세포주로 하여 시간에 따른 생산효율성도 분석하였다. 그 결과 AAV2와 pHelper DNA를 포함한 새로운 생산법은 기존의 방법에 비해 10배 이상 높은 생산효율성을 보였고, 293T에서 AAV2를 10 MOI로 감염한 후 5일째에 가장 높은 생산효율성을 보였는데, 생산세포 한 개 당 $1.61{ times}10^5$ virus genomes (v.g.)을 생산하는 결과였다. 따라서 이 생산조건을 다른 혈청형 생산에 적용한 결과, 모든 혈청형에서 생산세포주 한 개 당 $10^5$ v.g. 이상을 생산하는 효율성을 보였다. 한편, 다양한 AAV 혈청형을 한 가지 공통적인 방법으로 정량하기 위해 the universal PCR 프라이머를 제작하였고, 그것을 이용하여 신뢰성 높고 10개 분자까지도 증폭이 가능한 결과를 모든 혈청형에서 얻었다. 그러므로 이 한 쌍의 정량용 the universal 프라이머는 임상시험용 아데노바이러스벡터에 존재하는 AAV오염을 검출하는 것에도 사용 가능하다. |
