| 저자(한글) |
GONG, Pei-jie,ZHANG, Chao-hong,WEI, Rong,LI, Shu-xiu,WANG, Yue-jin |
| 저자(영문) |
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| 소속기관 |
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| 소속기관(영문) |
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| 출판인 |
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| 간행물 번호 |
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| 발행연도 |
2013-01-01 |
| 초록 |
액포가공효소(vacuole processing enzyme, VPE) 유전자는 식물세포의 예정세포사멸(programmed cell death)을 유발하는 핵심 유전자이다. 그리고 Beta;형 VPE는 종자 특이성 발현 및 종자 단백질의 성숙에 필수적인 유전자이다. 본 연구는 피노 누아르 포도(Vitis vinifera cv.Pinot Noir)가 개화한 후 서로 다른 단계의 8개 배주(ovules) cDNA 혼합샘플을 템플릿으로 RT-PCR 증폭을 진행하여 포도 beta;형 액포가공효소(vacuolar-processing enzyme) 유전자(Vv beta;VPE로 명명, 유전자은행 등록번호: KC136352)를 얻었다. 이 유전자에는 길이가 1485bp되는 개방형 해독틀(open reading frame, ORF)이 함유되어 있었다. Vv beta;VPE를 pGEX-6P-1 원핵발현 벡터(prokaryotic expression vector)에 클론한 후 대장균(Escherichia coli) BL21 중에 형질전환시켰다. 그리고 IPTG로 유도하여 분자량이 약 81.3kD인 봉입체 융합단백질(fusion protein of inclusion body) GST-Vv beta;VPE를 얻었다. 최적 유도조건(37℃에서 0.05mmol/L의 IPTG로 5시간 유도)에서 융합단백질 GST-Vv beta;VPE의 발현량이 제일 많은 것으로 나타났다. 그리고 유도한 단백질을 전기투석(electrodialysis)과 염산구아니딘(guanidine hydrochloride)으로 처리하여 면역요구에 도달하는 정제된 봉입체 단백질을 얻었다. 정제된 단백질로 뉴질랜드 토끼(New Zealand rabbit)를 면역시켜 다클론항혈청(polyclonal antibody)을 얻었다. 그리고 웨스턴 블럿(Western blot) 검사를 진행한 결과, 이 다클론항혈청(1:10000 희석)과 GST-Vv beta;VPE 융합 단백질의 식별반응(recognition reaction)은 비교적 우수하였다. 그러므로 얻은 항혈청은 Vv beta;VPE의 효소활성 분석, 면역아세포(immunoblast) 위치 분석 및 형질전환 식물 단백질 수준 검사 등에 이용될 수 있으며, 또한 Vv beta;VPE가 포도 배주의 발육과정에서의 작용을 심층적으로 연구하기 위한 기초 데이터를 제공하였다. |
| 원문URL |
http://click.ndsl.kr/servlet/OpenAPIDetailView?keyValue=03553784&target=NART&cn=NART69978431 |
| 첨부파일 |
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