| 저자(한글) |
SHEN, Qin,DENG, Han-qing,HOU, Wen-si,MA, Bai-lin,TAO, Hu |
| 초록 |
인간 엑토도메인 칼시토닌 수용체(ectodomain of calcitonin receptor, eCTR)는 칼시토닌(calcitonin) 수용체의 약물 표적 영역이다. 본 연구는 칼시토닌 수용체의 N 말단 세포외 영역 22~140 아미노산 잔기 영역을 절취하고 대장간균 선호성 코돈에 근거하여 최적화한 다음, 유전자를 인공 합성하여 pET22b(+) 벡터에 복제하였다. 그리고 구축된 발현 플라스미드를 대장간균 BL21(DE3) 내에 형질전환하여 발현시켰다. 발현 산물에 대한 복원, 정제 후 수용체-배수체 결합 실험을 수행하였다. 실험 결과, 표적 단백질은 대부분 봉입체(Inclusion body) 형식으로 존재하였다. 본 연구는 고효율적인 복원 방법을 탐색하였다. SDS-PAGE 감정 결과, 정제 단백질은 단일 밴드였으며, 질량 측정법으로 측정한 단백질 분자량과 이론 분자량이 일치했다. 복원 후의 단백질에 대하여 새로운 체외 활성화 측정법으로 검측한 결과, 해당 단백질의 살몰 칼시토닌(salmon calcitonin, sCT) 결합 능력이 강하다는 것을 증명하였다. 이는 해당 구조와 기능에 대한 심층 연구에 기반을 마련하였다. |
