| 저자(한글) |
ZHE, Xiao-jie,LI, Yang,LONG, Qiong,YAO, Yu-feng,SUN, Wen-jia,HUANG, Wei-wei,YANG, Xu,LIU, Cun-bao,MA, Yan-bing |
| 초록 |
목적: HPV16 E7 CTLs 항원 결정부위(Epitopes)를 전달하는 바이러스 유사 입자(Virus-like particles, VLPs)를 구축하여, 바이러스 유사 입자를 치료용백신(Therapeutic vaccine) 벡터로 사용할 수 있는가를 초보적으로 평가한다. 기법: 문헌 보고에 근거하여 효과적인 HPV16 E7 CTLs 결정부위를 선택하고 정(+) 사슬과 부(-) 사슬의 올리고뉴클레오티드(Oligonucleotide) 서열을 합성한 후, 어닐링 처리를 통하여 이중 DNA 단편을 얻는다. B형 간염의 핵심 항원을 발현하는 재조합 플라스미드 pThioHisA-HBcAg에서 이 단편을 복제하여, 항원 펩티드의 바이러스 유사 입자를 유도한다. IPTG로 재조합 균주를 유도한 후, SDS-PAGE로 표적 단백질의 발현을 감정한다. 균체 파괴 후 황산암모늄 염석법(Salting out method)과 자당 밀도구배 이심법을 이용하여 파괴된 균체를 정제한다. 또한 고효율 액상 겔 여과 크로마토그래피(HPLC gel filtration chromatography)와 전자현미경으로 바이러스 유사 입자의 존재를 감정한다. 바이러스 유사 입자로 TC-1 세포를 가진 종양 모델 생쥐를 면역 접종시키고, 생쥐의 종양 크기를 검사한다. 체외에서 항원 펩티드를 이용하여 비장 세포를 자극하고, ELISA로 IFN-γ의 발현 수준을 검사한다. 결과: 3개 재조합 발현 플라스미드에 대한 효소 절단 감정과 서열 측정 분석 결과, 구축 결과가 정확한 것으로 확인되었다. 발현된 재조합 단백질의 크기가 예상했던 크기에 부합되었으며, 바이러스 유사 입자를 형성하였다. 생쥐를 면역시킨 후, 이 입자는 종양 크기의 증가를 억제하였다. 항원 펩티드의 체외 자극은 면역 생쥐의 비장 세포 IFN-γ 발현을 촉진하였으며, 백신으로 인해 생체가 E7 특이성의 세포 면역 반응을 보였다 결론: HBcAg VLPs는 잠재능이 있는 치료용 백신 벡터이다. |
