| 저자(한글) |
ZHOU, Yan,WANG, Xiao-nan,YAN, Shan-shan,WU, Jin-yuan,SUN, Mao-sheng,ZHANG, Lei,LI, Hong-jun |
| 초록 |
목적: Lmx1A가 중간엽줄기세포의 신경원세포 전환 과정에서 일으키는 잠재적인 능력 탐구에 실험 기초를 제공하기 위해, 녹색 형광 단백(EGFP)과 전사 인자 Lmx1A(LIM homeoboxtranscription factor1-alpha)의 Recombinant adenovirns 재조합 아데노바이러스에 대한 구축과 포장을 통하여 Recombinant adenovirns 구축 방법의 가능성을 평가하였다. 방법: PCR 기법을 통하여 강화형 녹색 형광 단백(EGFP)과 전사인자 Lmx1A의 CDS 영역 서열을 획득하고 Recombinant adenovirns의 발현 플라스미드 pcDNA3.0BA를 구축하는데 성공했으며, PCR 방법으로 얻은 Recombinant adenovirns 발현 키트를 아데노바이러스 셔틀 플라스미드 pShuttleCMV 내에 삽입하였다. 그리고 아데노바이러스 골력 플라스미드 pAdEasy-1에 대한 상동재조합 과정을 거쳐 양성 재조합 플라스미드 pAd-EGFP-Lmx1A를 얻고, HEK293 세포내에서 아데노바이러스로 포장(package)하였다. EGFP와 Lmx1A 유전자를 가진 재조합 아데노바이러스로 인간 탯줄 중간엽줄기세포(human umbilical cordmesenchymal stem cells, hUC-MSCs)를 감염시키고 RT-PCR, 면역형광 및 Western blot 기법으로 EGFP와 Lmx1A의 발현 및 생성물의 위치를 검측하였다. 결과, 투사현미경으로 포장이 잘된 재조합 아데노바이러스를 관찰한 결과, 전형적인 아데노바이러스 과립 형태를 갖추고 있었으며 크기가 약 75nm이었다. Ad-EGFP-Lmx1A로 hUC-MSCs를 감염시킨 후 EGFP와 Lmx1A의 전사 산물을 검측한 결과, 해당 발현 산물 간에 상호 영향이 없었으며 발현 강도에 뚜렷한 차이가 없었다. 결론: Recombinant adenovirns 진핵 발현 플라스미드 pcDNA3.0BA는 2개 유전자의 재조합 아데노바이러스를 동시에 구축할 수 있으며, 아데노바이러스로 세포를 감염시킨 후 2개 유전자를 중간엽줄기세포에 전달하여 발현시킬 수 있다. EGFP에 대한 관찰을 통하여 아데노바이러스의 발현 효율을 실시간으로 관찰할 수 있다. 본 실험의 연구 결과는 임의 조합으로 이루어진 이중 유전자 발현을 위한 신속하고 효과적인 구축 방법을 건립하였다. 재조합 아데노바이러스 Ad-EGFPLmx1A의 성공적인 구축은 향후 Lmx1A가 중간엽줄기세포의 신경원 분화 과정에서 일으키는 작용을 연구하는데 실험 기초를 제공하였다. |
