| 초록 |
종래의 항-EpCAM 항체 치료의 일정치 않은 결과로 인해, 본 발명자들은 암 줄기세포 표지인 EpCAM를 표적하는 뉴클라아제-내성 RNA 앱타머의 개발을 고안하였다. 앱타머는 항체와 비교하여 10-20배 작기 때문에 최상의 조직 침투성을 갖으므로, 암을 표적하는데 있어서 항체보다 유리하다. 앱타머의 이러한 이점에도 불구하고, 면역조직화학법의 프로브 용도로만 제한적으로 보고되었다. 이론에 얽매이지 않더라도, 핵 내 존재하는 히스톤과 같은 양성 전하된 부위에 대한 다음이온(polyanion)성 핵산 앱타머의 정전기 인력으로 인한 비-특이적 염색이 장애가 되어 왔다. 본 발명은 EpCAM에 대한 RNA 앱타머이고, 이는 진단 및 치료 용도를 갖는다. 본 발명은 EpCAM에 특이적으로 결합하는 분리된(isolated) RNA 앱타머를 제공하고, 상기 앱타머는 서열 5'-GCGACUGGUUACCCGGUCG-3'(서열목록 제1서열)를 갖는 DT3가 아니다. 본 발명은 분리된 EpCAM에 특이적으로 결합하는 RNA 앱타머를 제공하고, 상기 앱타머는 서열 5'-ACGUAUCCCUUUUCCGUA-3'(서열목록 제2서열)을 포함한다.일 구현예에 따르면, 상기 EpCAM은 인간 EpCAM이다. 일 구현예에 따르면, 본 발명의 앱타머는 유방암 세포주에서 발현된 EpCAM에 대하여 약 90 nM 또는 그 이하의 해리상수를 갖는다. 다른 구현예에 따르면, 상기 해리상수는 약 65 nM 또는 그 이하이다. 또다른 구현예에 따르면, 상기 해리상수는 45 nM 또는 그 이하이다. 또다른 구현예에 따르면, 상기 해리상수는 MDA-MB-231 세포에 대하여 약 87 nM이다. 또다른 구현예에 따르면, 상기 해리상수는 MCF7 세포에 대하여 약 64 nM이다. 또다른 구현예에 따르면, 상기 해리상수는 T47D 세포에 대하여 약 41 nM이다. 또다른 구현예에 따르면, 본 발명의 앱타머는 대장아 세포주(HT29 세포)에서 발현된 EpCAM에 대하여 약 37 nM의 해리상수를 갖는다. 또다른 구현예에 따르면, 상기 분리된 RNA 앱타머는 서열목록 제2서열의 서열을 필수적으로 구성된다. 또다른 구현예에 따르면, 상기 분리된 RNA 앱타머는 서열목록 제2서열의 서열을 포함하고, 상기 서열의 길이는 19 내지 100 염기 사이이다. 또다른 구현예에 따르면, 상기 서열의 길이는 19 내지 40 염기 사이이다. 또다른 구현예에 따르면, 상기 서열의 길이는 19 내지 25 염기 사이이다. 본 명세서에서 사용되는 용어 “염기”는 구아닌(guanine; G), 아데닌(adenine; A), 우라실(uracil; U) 또는 시토신(cytosine; C)의 뉴클레오타이드 염기 또는 잔기를 의미한다. 상기 염기는 시토신 및 구아닌, 아데닌 및 우라실, 및 구아닌 및 우라실 사이에 수소결합이 형성될 수 있다. 또다른 구현예에 따르면, 상기 서열은 서열목록 제2서열 내 하나 이상의 치환을 포함한다. 또다른 구현예에 따르면, 상기 서열은 서열목록 제2서열의 서열 내 최소 하나, 둘, 셋, 넷, 다섯 또는 여섯 개의 치환으로 구성된다. 또다른 구현예에 따르면, 상기 서열은 서열목록 제2서열에 따른 앱타머의 줄기 부위 내 최소 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 치환으로 구성된다. 일 구현예에 따르면, 상기 줄기 부위는 앱타머의 2차원 구조로 예측한다. 일 구현예에 따르면, 상기 앱타머는 앱타머의 안정성( 인 비트로 또는 인 비보 )을 개선하는 하나 또는 이상의 변형(변형된 앱타머)을 포함한다. 적합한 변형은 본 명세서에서 논의된다. 일 구현예에 따르면, 피리미딘 염기는 2'-플루오로(2'-F)로 변형된다. 또다른 구현예에 따르면, RNA 앱타머의 3'말단은 뉴클레아제 소화로부터 보호되도록 변형된다. 또다른 구현예에 따르면, 앱타머는 5' 말단에 형광단 � |
