| 초록 |
[목적] 생리학적 활성물질을 코드화하는 이종 유전자를 발현시킬 수 있는 재조합 플라스미드와 재조합 플라스미드에 의해 형질전환된 미생물주의 제조방법을 제공한다.[구성] 제한효소를 사용하여 베이커유전자(B유전자) 및 챨리유전자(C유전자)를 함유하는 플라스미드를 절단하여 B 및 C유전자를 함유하는 출발 플라스미드 수용액에 제한 효소를 적당량 가한 후에 1-2시간 동안 전기영동으로 처리하여 원하는 DNA 단편을 회수한다. B 및 C유전자의 DNA 단편을 T4 DNA 리가아제를 사용하여 중요한 플라스미드의 제한효소 절단 부위에 결합시켜 재조합 플라스미드를 제조하고, DNA 단편 2개 이상을 유전자를 코드화하는 생리학적 활성물질에 동일한 방향으로 결합시킨다. 섭씨 15-32도의 YNB 액체배지 내에서 통기 및 교반하면서 숙주를 20-50시간 동안 배양하여 형질전환체를 배양하고, 배양된 미생물 세포를 완충용액에 현탁시키고, 초음파 처리하여 상등액을 원심분리로 회수한다. 모노클로날 항체를 사용하는 고정화 컬럼 또는 소수성 그룹을 사용하는 친화성 크로마토그래피에 의해 상등액을 정제하여 형질전환된 미생물주를 제조한다. |
