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[목적]살충제 조성물을 미증식 세포내에 캡슐화하여 사용할 수 있도록 살충제 조성물의제조방법 및 미증식 세포의 제조방법에 관한 것이다.[구성]살충제 역할을 하는 폴리펩타이드 독소를 코딩하는 유전자를 함유한 미생물을 배양하고, 프로테아제 불활성화 조건이나 세포벽 강화조건하에서 미생물세포를 사멸시켜 세포내 독소함유의 미분해에 가까운 단세포 미생물을 제조한다. 살충제는 Bacillus. thuringiensis 변이주 Kurstaki의 결정성 독소로 독성작용의 진행을 필요로 하는 예비형 또는 전구체나 활성형태로 생성된 폴리펩타이드이다. 이형유전자가 숙주세포에 의해 인지되는 전사 및 번역개시 및 종결 조절 시그널을 지녔을 때, 이형유전자와 접합한 조절 유전자를 사용한다. 이형 살충 유전자를 함유하는 세포숙주는 DNA 구조물이 있는 영양배지에서 배양되어 선택적 배지를 제공하여 모든 세포들이 이형유전자에 보유되도록 한다. 세포는 미분해 단계에서 변형되어 독소단백질이 존재하고 미분해 세포는 화학적 반응제를 포함하는 액성 반응제 배지와 혼합하여 섭씨온도 -10C~60C에서 교반하거나 또는 교반없이 혼합한다. 세포의 농도는 1ml 당 10의 2승에서 10의 10승으로 한다. 화학적 반응제는 원소번호 17-80의 할로겐 반응제가 섭씨온도 0C - 50C에서 요오드가 사용되면 바람직하고, 요오드화 작용은 산성수용액 배지에서 0.5-5%의 트리요오드 또는 요오드를 사용하여 수행된다. |
